Ташаккур ба шумо барои боздид аз Nature.com.Версияи браузере, ки шумо истифода мебаред, дастгирии маҳдуди CSS дорад.Барои таҷрибаи беҳтарин, мо тавсия медиҳем, ки шумо браузери навшударо истифода баред (ё Ҳолати мутобиқатро дар Internet Explorer хомӯш кунед).Дар ҳамин ҳол, барои таъмини дастгирии доимӣ, мо сайтро бе услубҳо ва JavaScript пешкаш хоҳем кард.
Toxoplasma gondii як паразити протозойи дохилиҳуҷайравӣ мебошад, ки муҳити микромуҳити мизбони сироятшударо танзим мекунад ва маълум аст, ки бо афзоиши варами мағзи сар алоқаманд аст.Дар ин таҳқиқот, мо фарзия дорем, ки miRNA-21-и экзосомалӣ аз сирояти Toxoplasma ба афзоиши варами мағзи сар мусоидат мекунад.Экзосомаҳо аз микроглияи бо токсоплазма сироятёфтаи BV2 тавсиф карда шуданд ва дохилшавии ҳуҷайраҳои глиомаи U87 тасдиқ карда шуданд.Профилҳои экспрессияи микроРНК-и экзосомавӣ бо истифода аз массивҳои microRNA ва microRNA-21A-5p, ки бо Toxoplasma gondii ва ҷудокунии варам алоқаманданд, таҳлил карда шуданд.Мо инчунин сатҳи mRNA-и генҳои бо варам алоқамандро дар ҳуҷайраҳои глиомаи U87 тавассути тағир додани сатҳи miR-21 дар экзосомаҳо ва таъсири экзосомаҳоро ба паҳншавии ҳуҷайраҳои глиомаи U87 инсон таҳқиқ кардем.Дар экзосомаҳои ҳуҷайраҳои глиомаи U87, ки бо Toxoplasma gondii сироят шудаанд, экспрессияи microRNA-21 зиёд шуда, фаъолияти генҳои зиддитумор (FoxO1, PTEN ва PDCD4) кам мешавад.Экзосомаҳои аз BV2 гирифташуда, ки бо Toxoplasma сироят шудаанд, паҳншавии ҳуҷайраҳои глиомаи U87-ро ба вуҷуд меоранд.Экзосомаҳо афзоиши ҳуҷайраҳои U87-ро дар модели варами муш ба вуҷуд меоранд.Мо пешниҳод мекунем, ки афзоиши экзосомалии miR-21 дар микроглияи сироятёфтаи BV2 бо токсоплазма метавонад ҳамчун як мусоидаткунандаи афзоиши ҳуҷайра дар ҳуҷайраҳои глиомаи U87 тавассути паст кардани танзими генҳои антитумор нақши муҳим бозад.
Тахмин меравад, ки дар соли 2018 дар саросари ҷаҳон зиёда аз 18,1 миллион ҳолати саратони пешрафта ташхис шудааст, ки ҳар сол тақрибан 297,000 варами системаи марказии асаб ташхис карда мешавад (1,6% тамоми варамҳо)1.Тадқиқотҳои қаблӣ нишон доданд, ки омилҳои хавфи рушди варамҳои мағзи сари инсон аз маҳсулоти гуногуни кимиёвӣ, таърихи оилавӣ ва радиатсияи ионизатсия аз таҷҳизоти табобатӣ ва ташхисии сар иборатанд.Бо вуҷуди ин, сабаби дақиқи ин бадбахтиҳо маълум нест.Тақрибан 20% ҳамаи бемориҳои саратон дар саросари ҷаҳон аз ҷониби агентҳои сироятӣ, аз ҷумла вирусҳо, бактерияҳо ва паразитҳо ба вуҷуд меоянд3,4.Патогенҳои сирояткунанда механизмҳои генетикии ҳуҷайраи мизбонро, аз қабили таъмири ДНК ва давраи ҳуҷайраро вайрон мекунанд ва метавонанд ба илтиҳоби музмин ва осеби системаи иммунӣ оварда расонанд5.
Воситаҳои сироятие, ки бо саратони инсон алоқаманданд, патогенҳои маъмултарини вирусӣ, аз ҷумла папилломавирусҳои инсон ва вирусҳои гепатити В ва С мебошанд.Паразитҳо инчунин метавонанд дар рушди саратони инсон нақши потенсиалӣ бозанд.Якчанд намуди паразитҳо, аз ҷумла Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis ва Hymenolepis nana, дар намудҳои гуногуни саратони инсон алоқаманданд 6,7,8.
Toxoplasma gondii як протозойи дохили ҳуҷайра аст, ки муҳити микрофлораи ҳуҷайраҳои мизбони сироятшударо танзим мекунад.Тахмин меравад, ки ин паразит тақрибан 30% аҳолии ҷаҳонро сироят карда, тамоми аҳолиро зери хатар мегузорад9,10.Toxoplasma gondii метавонад ба узвҳои ҳаётан муҳим, аз ҷумла системаи марказии асаб (CNS) сироят кунад ва боиси бемориҳои ҷиддие, аз қабили менингит ва энцефалитҳои марговар гардад, махсусан дар беморони норасоии масуният9.Бо вуҷуди ин, Toxoplasma gondii инчунин метавонад муҳити мизбони сироятшударо тавассути тағир додани афзоиши ҳуҷайраҳо ва аксуламали иммунӣ дар шахсони иммунитетӣ тағйир диҳад, ки ба нигоҳ доштани сирояти музмини асимптоматик оварда мерасонад9,11.Ҷолиб он аст, ки бо назардошти таносуби байни паҳншавии T. gondii ва бемории варами мағзи сар, баъзе гузоришҳо нишон медиҳанд, ки дар vivo тағйироти муҳити зисти мизбон аз сирояти музмини T. gondii ба микромуҳити варам шабоҳат доранд.
Экзосомаҳо ҳамчун коммуникаторҳои байниҳуҷайравӣ маълуманд, ки мундариҷаи биологӣ, аз ҷумла сафедаҳо ва кислотаҳои нуклеинро аз ҳуҷайраҳои ҳамсоя интиқол медиҳанд16,17.Экзосомаҳо метавонанд ба равандҳои биологии марбут ба варамҳо, аз қабили анти-апоптоз, ангиогенез ва метастаз дар муҳити микрофлораи варам таъсир расонанд.Махсусан, miRNAs (miRNAs), РНК-ҳои хурди рамзгузориашон тақрибан 22 нуклеотид дарозӣ доранд, танзимгарони муҳими генҳои пас аз транскриптӣ мебошанд, ки зиёда аз 30% mRNA-и инсонро тавассути маҷмааи хомӯш кардани миРНК (miRISC) назорат мекунанд.Toxoplasma gondii метавонад равандҳои биологиро тавассути назорати ифодаи miRNA дар ҳостҳои сироятшуда халалдор кунад.MiRNA-ҳои мизбон дорои сигналҳои муҳим барои танзими равандҳои биологии мизбон барои ноил шудан ба стратегияи зинда мондани паразит мебошанд.Ҳамин тариқ, омӯзиши тағирот дар профили miRNA-и мизбон ҳангоми сироят бо T. gondii метавонад ба мо кӯмак кунад, ки ҳамкории байни мизбон ва T. gondii равшантар фаҳмем.Дар ҳақиқат, Тиругнанам ва дигарон.15 пешниҳод кард, ки T. gondii бо тағир додани ифодаи он дар miRNA-ҳои мушаххаси мизбон, ки бо афзоиши варам алоқаманданд, ба саратоногенези мағзи сар мусоидат мекунад ва муайян кард, ки T. gondii метавонад дар ҳайвоноти таҷрибавӣ глиомаҳоро ба вуҷуд орад.
Тадқиқоти мазкур ба тағир додани миР-21-и экзосомалӣ дар микроглияи мизбон, ки бо Toxoplasma BV2 сироят ёфтааст, тамаркуз мекунад.Мо нақши эҳтимолии тағирёфтаи экзосомалии miR-21-ро дар афзоиши ҳуҷайраҳои глиомаи U87 аз ҳисоби нигоҳдорӣ дар ядрои FoxO1 / p27 мушоҳида кардем, ки ҳадафи аз ҳад зиёд ифодашудаи miR-21 мебошад.
Экзосомаҳое, ки аз BV2 гирифта шудаанд, бо истифода аз центрифугаи дифференсиалӣ ба даст оварда шудаанд ва бо усулҳои гуногун барои пешгирии олудашавӣ бо ҷузъҳои ҳуҷайра ё дигар весикулаҳо тасдиқ карда шудаанд.Электрофорези гели SDS-полиакриламидӣ (SDS-PAGE) намунаҳои фарқкунандаи байни сафедаҳои аз ҳуҷайраҳои BV2 ва экзосомаҳо истихроҷшударо нишон дод (Расми 1А) ва намунаҳо барои мавҷудияти Аликс баҳо дода шуданд, ки тавассути blotting ғарбии маркерҳои сафедаи экзосомалӣ дар .Тамғагузории Аликс дар сафедаҳои экзосома ёфт шуд, аммо на дар сафедаҳои лизати ҳуҷайраи BV2 (расми 1В).Илова бар ин, РНК-и тозашуда аз экзосомаҳои аз BV2 гирифташуда бо истифода аз биоанализер таҳлил карда шуд.Дар намунаи муҳоҷирати РНК экзосомалӣ зербахшҳои рибосомаии 18S ва 28S хеле кам мушоҳида мешуданд, ки покии боэътимодро нишон медиҳанд (Расми 1С).Ниҳоят, микроскопияи электронии интиқол нишон дод, ки экзосомаҳои мушоҳидашуда тақрибан 60-150 нм буда, сохтори косамонанди хоси морфологияи экзосома доранд (расми 1D).
Тавсифи экзосомаҳое, ки аз ҳуҷайраҳои BV2 гирифта шудаанд.(A) Саҳифаи варақаи маълумоти бехатарӣ.Протеинҳо аз ҳуҷайраҳои BV2 ё экзосомаҳое, ки аз BV2 гирифта шудаанд, ҷудо карда шудаанд.Намунаҳои сафеда дар байни ҳуҷайраҳо ва экзосомаҳо фарқ мекунанд.$B) Тањлили ѓарбшиносии маркери экзосомалї (Аликс).(C) Арзёбии РНК-и тозашуда аз ҳуҷайраҳои BV2 ва экзосомаҳои ҳосилшудаи BV2 бо истифода аз биоанализер.Ҳамин тариқ, дар РНК экзосомалӣ зербахшҳои рибосомӣ 18S ва 28S дар ҳуҷайраҳои BV2 хеле кам пайдо шуданд.(D) Микроскопияи электронии интиқол нишон дод, ки экзосомаҳои аз ҳуҷайраҳои BV2 ҷудошуда бо 2% уранилацетати манфӣ ранг карда шудаанд.Экзосомаҳо тақрибан 60-150 нм андоза ва косашакл доранд (Сонг ва Юнг, маълумоти нашрнашуда).
Бо истифода аз микроскопияи конфокалӣ, дохилӣсозии ҳуҷайравии экзосомаҳои аз BV2 гирифташуда ба ҳуҷайраҳои глиомаи U87 инсон мушоҳида карда шуд.Экзосомаҳои нишони PKH26 дар ситоплазмаи ҳуҷайраҳои U87 ҷойгир шудаанд.Ядроҳо бо DAPI ранг карда шуданд (расми 2А), ин нишон медиҳад, ки экзосомаҳои аз BV2 гирифташуда метавонанд аз ҷониби ҳуҷайраҳои мизбон дохилӣ карда шаванд ва ба муҳити ҳуҷайраҳои қабулкунанда таъсир расонанд.
Дохилсозии экзосомаҳои аз BV2 гирифташуда ба ҳуҷайраҳои глиомаи U87 ва экзосомаҳои аз BV2 гирифташуда, ки бо Toxoplasma RH сироят шудаанд, паҳншавии ҳуҷайраҳои глиомаи U87-ро ба вуҷуд оварданд.$A) Экзосомаҳое, ки бо ҳуҷайраҳои U87 фаро гирифта шудаанд, ки тавассути микроскопияи конфокалӣ чен карда шудаанд.Ҳуҷайраҳои глиомаи U87 бо экзосомаҳое, ки бо PKH26 (сурх) нишон дода шудаанд ё бидуни назорат барои 24 соат инкубатсия карда шуданд.Ядроҳо бо DAPI (кабуд) ранг карда шуданд ва сипас дар зери микроскопи конфокалӣ мушоҳида карда шуданд (барои миқёс: 10 мкм, x 3000).(B) паҳншавии ҳуҷайраҳои глиомаи U87 тавассути таҳлили паҳншавии ҳуҷайра муайян карда шуд.Ҳуҷайраҳои глиомаи U87 дар муддати нишондодашуда бо экзосомаҳо табобат карда шуданд. *P < 0,05 тавассути санҷиши Student's t гирифта шуд. *P < 0,05 тавассути санҷиши Student's t гирифта шуд. *P < 0,05 получено по t-критерию Стьюдента. *Р <0,05 аз рУи тести т-студент. *P < 0.05 通过学生t 检验获得。 *Р <0,05 * P < 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0,05 бо истифода аз t-testи Student ба даст оварда шудааст.
Пас аз тасдиқи дохиликунонии экзосомаҳои аз BV2 гирифташуда ба ҳуҷайраҳои глиомаи U87, мо таҳлилҳои паҳншавии ҳуҷайраҳоро анҷом додем, то нақши экзосомаҳои аз BV2 гирифташудаи токсоплазмаро дар рушди ҳуҷайраҳои глиомаи инсон тафтиш кунем.Табобати ҳуҷайраҳои U87 бо экзосомаҳо аз ҳуҷайраҳои аз T. gondii сироятёфтаи BV2 нишон дод, ки экзосомаҳои аз T. gondii сироятёфтаи BV2 боиси афзоиши назарраси ҳуҷайраҳои U87 дар муқоиса бо назорат (расми 2B).
Илова бар ин, афзоиши ҳуҷайраҳои U118 бо U87 натиҷаҳои якхела дошт, зеро токсоплазма экзосомаҳоро ҳавасманд кардааст, ки сатҳи баландтарини паҳншавӣ ба вуҷуд овард (маълумот нишон дода нашудааст).Дар асоси ин маълумот, мо метавонем нишон диҳем, ки экзосомаҳои сироятшудаи токсоплазма аз BV2 дар паҳншавии ҳуҷайраҳои глиома нақши муҳим доранд.
Барои таҳқиқи таъсири экзосомаҳои аз токсоплазма сироятёфтаи BV2 ба рушди варамҳо, мо ҳуҷайраҳои глиомаи U87-ро ба мушҳои бараҳна барои модели ксеногрант ворид кардем ва экзосомаҳои аз BV2 гирифташуда ё экзосомаҳои аз RH сироятёфтаи BV2 ворид кардем.Пас аз он ки варамҳо пас аз 1 ҳафта маълум шуданд, ҳар як гурӯҳи таҷрибавии 5 муш мувофиқи андозаи варамҳо барои муайян кардани ҳамон нуқтаи ибтидоӣ тақсим карда шуд ва андозаи варам барои 22 рӯз чен карда шуд.
Дар мушҳо бо модели ксенографти U87, дар рӯзи 22 дар гурӯҳи экзосомаи сироятшудаи RH, ки аз BV2 гирифта шудааст, ҳаҷм ва вазни хеле калонтари варамҳо мушоҳида карда шуданд (расми 3A, B).Аз тарафи дигар, байни гурӯҳи экзосомаи аз BV2 гирифташуда ва гурӯҳи назоратӣ пас аз муолиҷаи экзосома фарқияти назаррас дар андозаи варам вуҷуд надошт.Илова бар ин, мушҳое, ки бо ҳуҷайраҳои глиома ва экзосома ворид карда шудаанд, ҳаҷми калонтарини варамро дар гурӯҳи экзосомаҳои аз BV2 гирифташуда бо RH сироятшуда нишон доданд (расми 3C).Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки экзосомаҳои сироятшудаи токсоплазма, ки аз BV2 гирифта шудаанд, афзоиши глиомаро дар модели варами муш ба вуҷуд меоранд.
Онкогенези (AC) экзосомаҳои аз BV2 гирифташуда дар модели муши ксенографти U87.Андозаи варам (A) ва вазн (B) дар мушҳои бараҳнаи BALB/c, ки бо экзосомаҳои сироятшудаи RH аз BV2 гирифта шудаанд, ба таври назаррас афзоиш ёфтанд.Мушҳои бараҳнаи BALB/c (C) бо 1 x 107 ҳуҷайраҳои U87, ки дар омехтаи Матригел боздошта шудаанд, ба зери пӯст сӯзандору карда шуданд.Шаш рӯз пас аз тазриқ, 100 мкг экзосомаҳои аз BV2 гирифташуда дар мушҳо табобат карда шуданд.Андоза ва вазни варам мутаносибан дар рӯзҳои нишондодашуда ва баъд аз қурбонӣ чен карда шуданд. *Р <0,05. *Р <0,05. *Р < 0,05. *Р <0,05. *P <0,05. *P <0,05. *Р < 0,05. *Р <0,05.
Маълумот нишон дод, ки 37 miRNAs (16 overexpressed ва 21 downexpressed) алоқаманд бо масуният ё рушди варам дар microglia пас аз сироят бо штамми Toxoplasma RH (расми 4A) ба таври назаррас тағйир ёфт.Сатҳи ифодаи нисбии miR-21 дар байни miRNA-ҳои тағирёфта тавассути RT-PCR дар вақти воқеӣ дар экзосомаҳое, ки аз BV2 гирифта шудаанд, экзосомаҳое, ки бо ҳуҷайраҳои BV2 ва U87 коркард шудаанд, тасдиқ карда шуданд.Ифодаи miR-21 афзоиши назарраси экзосомаҳоро аз ҳуҷайраҳои BV2, ки бо Toxoplasma gondii (штамми RH) сироят ёфтааст, нишон дод (расми 4Б).Сатҳи ифодаи нисбии miR-21 дар ҳуҷайраҳои BV2 ва U87 пас аз гирифтани экзосомаҳои тағирёфта афзоиш ёфт (расми 4B).Сатҳи нисбии ифодаи miR-21 дар бофтаҳои мағзи беморони варам ва мушҳое, ки бо Toxoplasma gondii (штамми ME49) сироят шудаанд, мутаносибан нисбат ба назоратҳо баландтар буданд (расми 4C).Ин натиҷаҳо бо фарқиятҳои байни сатҳи ифодаи микроРНКҳои пешбинишуда ва тасдиқшуда дар vitro ва in vivo алоқаманданд.
Тағирот дар ифодаи экзосомалии miP-21a-5p дар микроглия, ки бо Toxoplasma gondii (RH) сироят ёфтааст.$A) Тағйироти назаррасро дар siRNA, ки бо масуният ё инкишофи варами пас аз сирояти T. gondii RH алоқаманд аст, нишон медиҳад.(B) Сатҳи ифодаи нисбии miR-21 тавассути RT-PCR дар вақти воқеӣ дар экзосомаҳои аз BV2 гирифташуда, экзосомаҳои бо BV2 коркардшуда ва ҳуҷайраҳои U87 муайян карда шуданд.(C) Дар бофтаҳои мағзи беморони варам (N = 3) ва мушҳои мубталои Toxoplasma gondii (штамми ME49) (N = 3) сатҳи нисбии ифодаи miR-21 пайдо шуданд. *P < 0,05 тавассути санҷиши Student's t гирифта шуд. *P < 0,05 тавассути санҷиши Student's t гирифта шуд. *P < 0,05 аз помощью t-критерия Стьюдента. * P <0,05 бо истифода аз t-testи Студент ба даст оварда шуд. *P < 0.05 通过学生t 检验获得。 *Р <0,05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0,05 бо истифода аз t-testи Student ба даст оварда шудааст.
Экзосомаҳо аз ҳуҷайраҳои сироятшудаи RH BV2 боиси афзоиши глиомаҳо дар vivo ва in vitro шуданд (расми 2, 3).Барои муайян кардани mRNA-ҳои дахлдор, мо сатҳи mRNA-и генҳои ҳадафи зиддитумор, қуттии сарпӯши O1 (FoxO1), PTEN ва марги барномарезишудаи ҳуҷайраи 4 (PDCD4) дар ҳуҷайраҳои U87, ки бо экзосомаҳои аз BV2 ё RH BV2 гирифта шудаанд, тафтиш кардем.Таҳлили биоинформатика нишон дод, ки якчанд генҳои бо варам алоқаманд, аз ҷумла генҳои FoxO1, PTEN ва PDCD4, маконҳои ҳатмии miR-2121,22 доранд.Сатҳи mRNA-и генҳои ҳадафи зидди варам дар экзосомаҳои аз RH сироятёфтаи BV2 дар муқоиса бо экзосомаҳои аз BV2 гирифташуда коҳиш ёфт (расми 5А).FoxO1 дар муқоиса бо экзосомаҳои аз BV2 тавлидшуда сатҳи сафедаҳои аз RH сироятёфтаро нишон дод (Расми 5B).Дар асоси ин натиҷаҳо, мо метавонем тасдиқ кунем, ки экзосомаҳое, ки аз BV2 бо RH сироят шудаанд, генҳои зидди онкогениро коҳиш медиҳанд ва нақши онҳоро дар афзоиши варам нигоҳ медоранд.
Экзосомаҳои аз BV2 гирифташудаи токсоплазма, ки аз BV2 гирифта шудаанд, фишори генҳои зидди варамро дар ҳуҷайраҳои глиомаи U87 аз ҷониби экзосомаҳои аз BV2 сироятёфтаи Toxoplasma RH ба вуҷуд меоранд.(A) ПТР-и воқеии ифодаи FoxO1, PTEN ва PDCD4 дар экзосомаҳое, ки аз T. gondii RH сироятшуда BV2 нисбат ба экзосомаҳои PBS гирифта шудаанд.β-актин mRNA ҳамчун назорат истифода шуд.(B) Ифодаи FoxO1 тавассути blotting ғарбӣ муайян карда шуд ва маълумоти денситометрӣ бо истифода аз барномаи ImageJ оморӣ арзёбӣ карда шуданд. *P < 0,05 тавассути санҷиши Student's t гирифта шуд. *P < 0,05 тавассути санҷиши Student's t гирифта шуд. *P < 0,05 аз помощью t-критерия Стьюдента. * P <0,05 бо истифода аз t-testи Студент ба даст оварда шуд. *P < 0.05 通过学生t 检验获得。 *Р <0,05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0,05 бо истифода аз t-testи Student ба даст оварда шудааст.
Барои фаҳмидани таъсири miP-21 дар экзосомаҳо ба танзими генҳои бо варам алоқаманд, ҳуҷайраҳои U87 бо ингибитори miP-21 бо истифода аз Lipofectamine 2000 трансфексия карда шуданд ва ҳуҷайраҳо 24 соат пас аз трансфекция ҷамъоварӣ карда шуданд.Сатҳи ифодаи FoxO1 ва p27 дар ҳуҷайраҳои бо ингибиторҳои miR-21 трансфексияшуда бо ҳуҷайраҳои бо экзосомаҳои BV2 гирифташуда бо истифода аз qRT-PCR муқоиса карда шуданд (расми 6A, B).Трансфексияи ингибитори miR-21 ба ҳуҷайраҳои U87 ифодаи FoxO1 ва p27-ро ба таври назаррас коҳиш дод (расми 6).
Экзосомалии аз RH сироятёфта, ки аз BV2 гирифта шудааст, miP-21 ифодаи FoxO1 / p27-ро дар ҳуҷайраҳои глиомаи U87 тағир дод.Ҳуҷайраҳои U87 бо ингибитори miP-21 бо истифода аз Lipofectamine 2000 трансфексия карда шуданд ва ҳуҷайраҳо 24 соат пас аз интиқол ҷамъоварӣ карда шуданд.Сатҳи ифодаи FoxO1 ва p27 дар ҳуҷайраҳои бо ингибиторҳои miR-21 трансфексияшуда бо сатҳҳои ҳуҷайраҳои бо экзосомаҳои BV2 гирифташуда бо истифода аз qRT-PCR (A, B) муқоиса карда шуданд.
Барои халос шудан аз аксуламали иммунии мизбон, паразити токсоплазма ба кистаи бофта табдил меёбад.Онҳо бофтаҳои гуногун, аз ҷумла майна, дил ва мушакҳои скелетро дар тӯли умри мизбон паразит мекунанд ва аксуламали иммунии мизбонро тағйир медиҳанд.Илова бар ин, онҳо метавонанд давраи ҳуҷайра ва апоптози ҳуҷайраҳои мизбонро танзим карда, ба паҳншавии онҳо мусоидат кунанд14,24.Toxoplasma gondii асосан ҳуҷайраҳои дендритии мизбон, нейтрофилҳо ва насли моноцитҳо/макрофагҳо, аз ҷумла микроглияи майнаро сироят мекунад.Toxoplasma gondii фарқияти макрофагҳои фенотипи М2-ро ба вуҷуд меорад, ба муолиҷаи захмҳо пас аз сирояти патоген таъсир мерасонад ва инчунин бо гиперваскуляризатсия ва фибрози грануломатозӣ алоқаманд аст.Ин патогенези рафтории сирояти Toxoplasma метавонад бо маркерҳои марбут ба рушди варам алоқаманд бошад.Муҳити душманонае, ки аз ҷониби Toxoplasma танзим карда мешавад, метавонад ба пеш аз саратони мувофиқ монанд бошад.Аз ин рӯ, метавон тахмин кард, ки сирояти токсоплазма бояд ба рушди варамҳои мағзи сар мусоидат кунад.Дар асл, сатҳи баланди сирояти токсоплазма дар хунобаи беморони гирифтори варамҳои гуногуни мағзи сар ба қайд гирифта шудааст.Илова бар ин, Toxoplasma gondii метавонад дигар эффектори канцерогенӣ бошад ва ба таври синергетикӣ барои кӯмак ба дигар канцерогенҳои сироятӣ дар рушди варамҳои мағзи сар амал кунад.Дар робита ба ин, бояд қайд кард, ки P. falciparum ва вируси Эпштейн-Барр ба таври синергетикӣ ба ташаккули лимфомаи Буркитт мусоидат мекунанд.
Нақши экзосомаҳо ҳамчун танзимкунанда дар соҳаи тадқиқоти саратон ба таври васеъ таҳқиқ карда шудааст.Бо вуҷуди ин, нақши экзосомаҳо дар байни паразитҳо ва мизбонҳои сироятшуда ҳанӯз ҳам кофӣ фаҳмида нашудааст.То ба ҳол, танзимгарони гуногун, аз ҷумла сафедаҳои махфӣ, равандҳои биологиро шарҳ доданд, ки тавассути онҳо паразитҳои протозой ба ҳамлаи мизбон муқовимат мекунанд ва сироятро давом медиҳанд.Ба наздикӣ, консепсияи афзоянда вуҷуд дорад, ки микровесикулҳои бо протозой алоқаманд ва микроРНКҳои онҳо бо ҳуҷайраҳои мизбон ҳамкорӣ мекунанд, то барои зинда мондани онҳо муҳити мусоид фароҳам оранд.Аз ин рӯ, барои кашф кардани робитаи байни miRNA-ҳои тағирёфтаи экзосомалӣ ва паҳншавии ҳуҷайраҳои глиома таҳқиқоти иловагӣ лозим аст.Тағйирёбии MicroRNA (генҳои кластерӣ miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 ва miR-17-92) ба промоутер STAT3 дар макрофагҳои сироятшудаи токсоплазмаи инсон пайваст мешавад, танзим карда мешавад ва зидди -апоптоз дар посух ба сирояти Toxoplasma gondii 29.Сирояти токсоплазма экспрессияи miR-17-5p ва miR-106b-5p-ро зиёд мекунад, ки бо якчанд бемориҳои гиперпролиферативӣ алоқаманданд 30.Ин маълумотҳо нишон медиҳанд, ки miRNA-ҳои мизбон, ки тавассути сирояти Toxoplasma танзим мешаванд, молекулаҳои муҳим барои зинда мондани паразитҳо ва патогенез дар рафтори биологии мизбон мебошанд.
miRNA-ҳои тағирёфта метавонанд ба намудҳои гуногуни рафтор ҳангоми оғоз ва пешрафти ҳуҷайраҳои ашаддӣ, аз ҷумла глиомаҳо таъсир расонанд: худкифоии сигналҳои афзоиш, ҳассосият ба сигналҳои монеъкунандаи афзоиш, саркашӣ аз апоптоз, потенсиали репликативии номаҳдуд, ангиогенез, инвазия ва метастаз ва илтиҳоб.Дар глиома, miRNA-ҳои тағирёфта дар якчанд таҳқиқоти профили экспрессия муайян карда шудаанд.
Дар таҳқиқоти мазкур, мо сатҳи баланди ифодаи miRNA-21-ро дар ҳуҷайраҳои мизбони сироятшудаи токсоплазма тасдиқ кардем.miR-21 ҳамчун яке аз микроРНК-ҳои аз ҳад зиёд ифодашаванда дар варамҳои сахт, аз ҷумла глиомаҳо, 33 муайян карда шудааст ва ифодаи он бо дараҷаи глиома алоқаманд аст.Ҷамъоварии далелҳо нишон медиҳанд, ки miR-21 як онкогени нав аст, ки ҳамчун омили зидди апоптозӣ дар афзоиши глиома амал мекунад ва дар бофтаҳо ва плазмаи ашаддии мағзи сари инсон хеле зиёд ифода шудааст.Ҷолиб он аст, ки ғайрифаъолияти miR-21 дар ҳуҷайраҳо ва бофтаҳои глиома боиси ҷилавгирӣ аз паҳншавии ҳуҷайраҳо дар натиҷаи апоптоз аз каспаза вобаста аст.Таҳлили биоинформатикии ҳадафҳои пешбинишудаи miR-21 генҳои сершумори супрессори варамҳоро, ки бо роҳҳои апоптоз алоқаманданд, ошкор кард, аз ҷумла марги барномарезишудаи ҳуҷайра 4 (PDCD4), тропомиозин (TPM1), PTEN ва қуттии форвард O1 (FoxO1), бо макони ҳатмии miR-2121..22.38.
FoxO1, ҳамчун яке аз омилҳои транскрипсия (FoxO), дар рушди намудҳои гуногуни саратони инсон иштирок мекунад ва метавонад ифодаи генҳои супрессори варамро ба монанди p21, p27, Bim ва FasL40 танзим кунад.FoxO1 метавонад ингибиторҳои сикли ҳуҷайраро, ба монанди p27, барои боздоштани афзоиши ҳуҷайраҳо пайваст ва фаъол созад.Ғайр аз он, FoxO1 як эффектори калидии сигнализатсияи PI3K/Akt мебошад ва бисёр равандҳои биологиро ба мисли пешравии сикли ҳуҷайра ва тафриқаи ҳуҷайра тавассути фаъолсозии транскрипсияи p2742 танзим мекунад.
Хулоса, мо боварӣ дорем, ки miR-21 экзосомавӣ, ки аз микроглияи сироятшудаи токсоплазма гирифта шудааст, метавонад ҳамчун танзимгари афзоиши ҳуҷайраҳои глиома нақши муҳим бозад (расми 7).Бо вуҷуди ин, барои дарёфти иртиботи мустақим байни экзосомалии miR-21, сирояти тағирёфтаи токсоплазма ва афзоиши глиома таҳқиқоти иловагӣ лозиманд.Интизор меравад, ки ин натиҷаҳо барои омӯзиши робитаи байни сирояти токсоплазма ва паҳншавии глиома нуқтаи ибтидоӣ фароҳам оранд.
Дар ин тадқиқот диаграммаи схематикии механизми канцерогенези глиома (мағзи сар) пешниҳод карда шудааст.Муаллиф дар PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA) ҷалб мекунад.
Ҳама протоколҳои таҷрибавӣ дар ин таҳқиқот, аз ҷумла истифодаи ҳайвонот, мувофиқи Дастурҳои стандартии этикии Кумитаи нигоҳубини ҳайвонот ва корбарони Донишгоҳи Миллии Сеул буданд ва аз ҷониби Шӯрои баррасии институтсионалии Мактаби тиббии Донишгоҳи Миллии Сеул (рақами IRB SNU-) тасдиқ карда шуданд. 150715).-2).Ҳама расмиёти таҷрибавӣ мувофиқи тавсияҳои ARRIVE гузаронида шуданд.
Микроглияи муши BV2 ва ҳуҷайраҳои глиомаи U87 дар миёнаравии тағирёфтаи уқоби Дулбекко (DMEM; Welgene, Сеул, Корея) ва Муносибати Институти ёдбуди Росвелл Парк (RPMI; Welgene) парвариш карда шуданд, ки ҳар кадоми онҳо 10% хунобаи гови ҳомила, 4 ммл доранд. глутамин, 0,2 мм пенициллин ва 0,05 мм стрептомицин.Ҳуҷайраҳо дар инкубатор бо 5% CO2 дар 37 ° C парвариш карда шуданд.Хатти дигари ҳуҷайраи глиома, U118, барои муқоиса бо ҳуҷайраҳои U87 истифода шудааст.
Барои ҷудо кардани экзосомаҳо аз штаммҳои бо T. gondii сироятшуда RH ва ME49, tachyzoites T. gondii (штамм RH) аз холигии шиками мушҳои 6-ҳафтаинаи BALB/c, ки 3-4 рӯз пеш ворид карда шудаанд, ҷамъоварӣ карда шуданд.Тахизоитҳо се маротиба бо PBS шуста шуданд ва бо центрифуга дар 40% Перколл (Сигма-Олдрих, Сент-Луис, МО, ИМА)43 тоза карда шуданд.Барои ба даст овардани тахизоитҳои штамми ME49, мушҳои BALB/c бо 20 кистаи матоъ ба дохили перитоналӣ ворид карда шуданд ва трансформатсияи тахизоит дар кистаҳо тавассути шустани холигоҳи шикам дар рӯзи 6-8-уми пас аз сироят (PI) ҷамъоварӣ карда шуд.Мушҳо бо PBS сироят шудаанд.Тахизоитҳои ME49 дар ҳуҷайраҳои иловашуда бо 100 мкг/мл пенициллин (Гибко/БРЛ, Гранд Айленд, NY, ИМА), 100 мкг/мл стрептомицин (Гибко/БРЛ) ва 5% хунобаи гови ҳомила (Лонза, Уолкерсвилл, MD) парвариш карда шуданд. .., ИМА) дар 37 °C ва 5% гази карбон.Пас аз парвариш дар ҳуҷайраҳои Веро, тахизоитҳои ME49 ду маротиба аз сӯзани 25 гаиметрӣ ва сипас аз филтри 5 микрон барои тоза кардани партовҳо ва ҳуҷайраҳо гузаронида шуданд.Пас аз шустан, тахизоитҳо дар PBS44 дубора боздошта шуданд.Кистаҳои бофтаи штамми Toxoplasma gondii ME49 тавассути сӯзандоруи дохилипардаки кистаҳое, ки аз мағзи мушҳои сироятшудаи C57BL/6 ҷудо карда шудаанд (Center Bio Animal Center, Seongnam, Корея).Майнаи мушҳои мубталои ME49 пас аз 3 моҳи PI ҷамъоварӣ карда шуданд ва дар зери микроскоп барои ҷудо кардани кистаҳо бурида шуданд.Мушҳои сироятшуда дар Мактаби тиббии Донишгоҳи Миллии Сеул дар шароити махсуси патогенӣ (SPF) нигоҳ дошта шуданд.
РНК-и умумӣ аз экзосомаҳои BV2, ҳуҷайраҳои BV2 ва бофтаҳо бо истифода аз маҷмӯаи miRNeasy Mini (Qiagen, Hilden, Олмон) мувофиқи дастурҳои истеҳсолкунанда, аз ҷумла вақти инкубатсия барои марҳилаи элюсия истихроҷ карда шуд.Консентратсияи РНК дар спектрофотометри NanoDrop 2000 муайян карда шуд.Сифати микромассивҳои РНК бо истифода аз биоанализери Agilent 2100 (Agilent Technologies, Амстелвен, Нидерландия) арзёбӣ шуд.
DMEM бо 10% экзосома камбизоат бо роҳи ултрацентрифуга дар 100,000 г барои 16 соат дар 4 ° C омода карда шуд ва тавассути филтри 0,22 мкм филтр карда шуд (Налгене, Рочестер, NY, ИМА).Ҳуҷайраҳои BV2, 5 × 105, дар DMEM парвариш карда шуданд, ки дорои 10% FBS-и экзосома ва 1% антибиотикҳо дар 37 ° C ва 5% CO2 мебошанд.Пас аз 24 соати инкубатсия, тахизоитҳои штамми RH ё ME49 (MOI = 10) ба ҳуҷайраҳо илова карда шуданд ва паразитҳои ҳуҷумнашаванда дар давоми як соат хориҷ карда шуданд ва бо DMEM пур карда шуданд.Экзосомаҳо аз ҳуҷайраҳои BV2 тавассути центрифугаи тағирёфтаи дифференсиалӣ ҷудо карда шуданд, ки усули васеъ истифодашаванда мебошад.Пелети экзосомаро дар 300 мкл PBS барои таҳлили РНК ё сафеда дубора суспенд кунед.Консентратсияи экзосомаҳои ҷудошуда бо истифода аз маҷмӯаи таҳлили протеини BCA (Пирс, Рокфорд, IL, ИМА) ва спектрофотометри NanoDrop 2000 муайян карда шуд.
Преципитҳо аз ҳуҷайраҳои BV2 ё экзосомаҳое, ки аз BV2 гирифта шудаанд, дар маҳлули истихроҷи протеини PRO-PREP™ (iNtRon Biotechnology, Сонгнам, Корея) лизис карда шуданд ва сафедаҳо ба гелҳои полиакриламиди 10% SDS рангшудаи Coomassie бор карда шуданд.Илова бар ин, сафедаҳо ба мембранаҳои PVDF барои 2 соат интиқол дода шуданд.Блокҳои ғарбӣ бо истифода аз антитело Аликс (Cell Signaling Technology, Беверли, MA, ИМА) ҳамчун маркери экзосомалӣ тасдиқ карда шуданд.Ҳамчун антитело дуюмдараҷаи HRP-конъюгатшудаи бузи зидди муш IgG (H + L) (Bethyl Laboratories, Монтгомери, TX, ИМА) ва анализатори тасвири люминесценти LAS-1000 (Fuji Photographic Film, Токио, Ҷопон) истифода шуданд..Барои омӯхтани андоза ва морфологияи экзосомаҳо микроскопияи электронии интиқол гузаронида шуд.Экзосомаҳое, ки аз ҳуҷайраҳои BV2 ҷудо карда шудаанд (6,40 мкг/мкл) дар торҳои бо карбон пӯшонидашуда омода карда шуданд ва бо 2% уранил ацетат барои 1 дақиқа манфӣ ранг карда шуданд.Намунаҳои омодашуда дар шиддати суръатбахшии 80 кВ бо истифода аз JEOL 1200-EX II (Токио, Ҷопон), ки бо камераи CCD ES1000W Erlangshen муҷаҳҳаз шудаанд (Гатан, Плезантон, CA, ИМА) мушоҳида карда шуданд.
Экзосомаҳои аз BV2 гирифташуда бо истифода аз маҷмӯаи Linker Red Fluorescent PKH26 (Sigma-Oldrich, Сент-Луис, МО, ИМА) барои 15 дақиқа дар ҳарорати хонагӣ ранг карда шуданд.Ҳуҷайраҳои U87, 2 × 105, бо экзосомаҳои бо нишони PKH26 (сурх) ё бе экзосома ҳамчун назорати манфӣ, дар 37 ° C барои 24 соат дар инкубатори 5% CO2 инкубатсия карда шуданд.Ядроҳои ҳуҷайраҳои U87 бо DAPI (кабуд) ранг карда шуданд, ҳуҷайраҳои U87 дар 4% параформальдегид барои 15 дақиқа дар 4 ° C собит карда шуданд ва сипас дар системаи микроскопи конфокалии Leica TCS SP8 STED CW таҳлил карда шуданд (Leica Microsystems, Mannheim, Олмон).мушоҳидашаванда.
cDNA аз siRNA бо истифода аз синтези аввалини Mir-X siRNA ва маҷмӯаи SYBR qRT-PCR (Takara Bio Inc., Shiga, Ҷопон) синтез карда шуд.ПТР-и миқдорӣ дар вақти воқеӣ бо истифода аз системаи муайянкунии PCR дар вақти воқеии iQ5 (Bio-Rad, Hercules, CA, ИМА) бо истифода аз праймерҳо ва қолабҳои омехта бо SYBR Premix анҷом дода шуд.ДНК барои 40 давраи денатуратсия дар 95°С барои 15 сония ва коркард дар 60°С барои 60 сония пурзӯр карда шуд.Маълумот аз ҳар як реаксияи PCR бо истифода аз модули таҳлили маълумоти нармафзори системаи оптикии iQ™5 (Bio-Rad) таҳлил карда шуд.Тағйироти нисбӣ дар ифодаи ген байни генҳои мавриди ҳадаф интихобшуда ва β-актин/siRNA (ва U6) бо истифода аз усули каҷи стандартӣ ҳисоб карда шуданд.Пайдарпаии ибтидоии истифодашуда дар ҷадвали 1 нишон дода шудааст.
3 x 104 U87 глиома дар лавҳаҳои 96-чоҳ шинонда шуданд ва бо экзосомаҳои сироятшудаи токсоплазма, ки аз BV2 (50 мкг/мл) ё экзосомаҳои напулсӣ аз BV2 (50 мкг/мл) гирифта шудаанд, ҳамчун назорат дар соатҳои 12, 18 ва 36 омехта карда шуданд. .Сатҳи паҳншавии ҳуҷайраҳо бо истифода аз маҷмӯаи ҳисобкунии ҳуҷайраҳо-8 (Дожиндо, Кумамото, Ҷопон) муайян карда шуд (Рақмҳои иловагӣ S1-S3) 46.
Мушҳои бараҳнаи занонаи 5-ҳафтаинаи BALB/c аз Orient Bio (Seongnam-si, Кореяи Ҷанубӣ) харида шуданд ва дар алоҳидагӣ дар қафасҳои хушкида дар ҳарорати хонагӣ (22±2°C) ва намӣ (45±15°C) нигоҳ дошта шуданд.%) дар ҳарорати хонагӣ (22±2°C) ва намӣ (45±15%).Дар доираи SPF (Маркази ҳайвоноти тиббии Донишгоҳи Миллии Сеул) як давраи нури 12-соата ва давраи торикии 12-соата анҷом дода шуд.Мушҳо ба таври тасодуфӣ ба се гурӯҳи аз 5 муш тақсим карда шуданд ва ҳамаи гурӯҳҳо бо 400 мл PBS, ки дорои 1 x 107 U87 ҳуҷайраҳои глиома ва омили афзоиши BD Matrigel™ (BD Science, Miami, FL, ИМА) кам карда шудаанд, сӯзандору карда шуданд.Шаш рӯз пас аз тазриқи варам, 200 мг экзосомаҳое, ки аз ҳуҷайраҳои BV2 гирифта шудаанд (бо/бе сирояти Toxoplasma) ба макони варам ворид карда шуданд.Бисту ду рӯз пас аз сирояти варам, андозаи варами мушҳо дар ҳар гурӯҳ бо калипер дар як ҳафта се маротиба чен карда шуд ва ҳаҷми варам бо формулаи: 0,5 × (паҳно) × 2 × дарозӣ ҳисоб карда шуд.
Таҳлили ифодаи MicroRNA бо истифода аз массиви miRNA miRCURYTM LNA, насли 7-ум дорои массиви mmu ва rno (EXIQON, Vedbaek, Дания) 1119 муши хуб тавсифшуда дар байни 3100 зондҳои забти миРНК-и инсон, муш ва каламушро фаро мегирад.Дар давоми ин тартиб, аз 250 то 1000 нг РНК аз 5′-фосфат тавассути табобат бо фосфатазаи ишқории рӯдаи гӯсола хориҷ карда шуд ва пас аз он бо ранг кардани флуоресценти сабз Hy3 тамғагузорӣ карда шуд.Пас аз он, намунаҳои нишондодашуда тавассути бор кардани слайдҳои микроаррей бо истифода аз маҷмӯаи камераи гибридизатсия (Agilent Technologies, Санта Клара, CA, ИМА) ва маҷмӯаи слайдҳои гибридизатсия (Agilent Technologies) гибридизатсия карда шуданд.Гибридизатсия дар давоми 16 соат дар ҳарорати 56 ° C гузаронида шуд, пас микроаррейҳо мувофиқи тавсияҳои истеҳсолкунанда шуста шуданд.Сипас слайдҳои микроаррей коркардшуда бо истифода аз системаи сканери микроаррей Agilent G2565CA (Agilent Technologies) скан карда шуданд.Тасвирҳои сканшуда бо истифода аз версияи нармафзори Agilent Feature Extraction 10.7.3.1 (Agilent Technologies) ворид карда шуданд ва шиддатнокии флуорессенси ҳар як тасвир бо истифода аз файли мувофиқи GAL протоколи тағирёфтаи Exiqon муайян карда шуд.Маълумоти микроаррей барои омӯзиши ҷорӣ дар пойгоҳи додаҳои GEO таҳти рақами воридшавии GPL32397 нигоҳ дошта мешавад.
Профилҳои экспрессияи miRNAs баркамол экзосомалӣ дар микроглияи RH ё штаммҳои ME49, ки бо Toxoplasma сироят шудаанд, бо истифода аз асбобҳои гуногуни шабакавӣ таҳлил карда шуданд.miRNA-ҳои марбут ба рушди варам бо истифода аз miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) муайян карда шуданд ва бо шиддати муқарраршудаи сигнал (log2) аз 8,0 зиёдтар филтр карда шуданд.Дар байни miRNA-ҳо, miRNA-ҳои ба таври дифференсиалӣ ифодаёфта бештар аз 1,5 маротиба тавассути таҳлили филтри миРНКҳо, ки бо штаммҳои RH ё ME49, ки бо T. gondii сироят шудаанд, тағир ёфтаанд.
Ҳуҷайраҳо дар лавҳаҳои шаш-чоҳ (3 x 105 ҳуҷайра/чоҳ) дар opti-MEM (Гибко, Карлсбад, CA, ИМА) бо истифода аз Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, ИМА) тухмипошак карда шуданд.Ҳуҷайраҳои трансфексияшуда дар давоми 6 соат парвариш карда шуданд ва сипас миёна ба муҳити пурраи тару тоза иваз карда шуд.Ҳуҷайраҳо 24 соат пас аз трансфекция ҷамъоварӣ карда шуданд.
Таҳлили оморӣ асосан бо истифода аз t-test Student бо нармафзори Excel (Microsoft, Вашингтон, ДС, ИМА) анҷом дода шуд.Барои таҳлили таҷрибавии ҳайвонот, ANOVA дуҷониба бо истифода аз нармафзори Prism 3.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA, ИМА) анҷом дода шуд. Қиматҳои P < 0,05 аз ҷиҳати омор муҳим ҳисобида шуданд. Қиматҳои P < 0,05 аз ҷиҳати омор муҳим ҳисобида шуданд. Значения P <0,05 статистически статистики. Қиматҳои P <0,05 аз ҷиҳати омор муҳим ҳисобида шуданд. P 值< 0.05 被认为具有统计学意义。 P 值 < 0,05 Значения P <0,05 статистически статистики. Қиматҳои P <0,05 аз ҷиҳати омор муҳим ҳисобида шуданд.
Ҳама протоколҳои таҷрибавии дар ин таҳқиқот истифодашуда аз ҷониби Шӯрои баррасии институтсионалии Мактаби тиббии Донишгоҳи Миллии Сеул (IRB рақами SNU-150715-2) тасдиқ карда шудаанд.
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Фурли, J. ва дигарон.Сатҳи тахминии саратон ва фавти ҷаҳонӣ дар соли 2018: манбаъҳо ва усулҳои GLOBOCAN.Тафсир.Ҷ. Рак 144, 1941–1953 (2019).
Рашид, С., Реҳман, К. ва Акаш, MS Фаҳмиши омилҳои хавфи варамҳои мағзи сар ва мудохилаҳои табобатии онҳо. Рашид, С., Реҳман, К. ва Акаш, MS Фаҳмиши омилҳои хавфи варамҳои мағзи сар ва мудохилаҳои табобатии онҳо.Рашид, С., Реҳман, К. ва Акаш, MS Баррасии омилҳои хавф барои варамҳои майна ва мудохилаҳои асосии терапевтӣ. Rasheed, S., Rehman, K. & Akash, MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施。 Рашид, С., Реҳман, К. ва Акаш, MS Фаҳмиши амиқи омилҳои хавфи варами майна ва мудохилаҳои табобатӣ.Рашид, С., Реҳман, К. ва Акаш, MS Баррасии омилҳои хавф барои варамҳои майна ва мудохилаҳои асосии терапевтӣ.Илми биотиббӣ.Фармацевт.143, 112119 (2021).
Като, I., Zhang, J. & Sun, J. Таъсири бактериявӣ-вирусӣ дар саратони рӯдаи узвҳои таносулии инсон ва занона: Хулосаи далелҳои эпидемиологӣ ва лабораторӣ. Като, I., Zhang, J. & Sun, J. Таъсири бактериявӣ-вирусӣ дар саратони рӯдаи узвҳои таносулии инсон ва занона: Хулосаи далелҳои эпидемиологӣ ва лабораторӣ.Като И., Чжан Ҷ. ва Сун Ҷ. Таъсири бактериявӣ-вирусӣ дар саратони рӯдаи меъдаю рӯдаҳои инсон ва узвҳои таносули занон: мухтасари маълумоти эпидемиологӣ ва лабораторӣ. Като, И., Чжан, Ҷ. & Сан, Ҷ. 人类口腔消化道癌和女性生殖道癌中的细菌-病毒相互作用：北毒相互作用：化道癌和据总结。 Като, I., Zhang, J. & Sun, J. Таъсири бактериявӣ-вирусӣ дар ҳозимаи холигоҳи даҳони инсон ва узвҳои репродуктивии занон: хулосаи илми машҳури беморӣ ва далелҳои лабораторӣ.Като И., Чжан Ҷ. ва Сун Ҷ. Таъсири бактериявӣ-вирусӣ дар саратони меъдаю рӯдаҳои инсон ва саратони узвҳои таносули занон: мухтасари маълумоти эпидемиологӣ ва лабораторӣ.Саратон 14, 425 (2022).
Magon, KL & Parish, JL Аз сироят то саратон: Чӣ гуна вирусҳои варами ДНК мубодилаи карбон ва липидҳои марказии ҳуҷайраро тағир медиҳанд. Magon, KL & Parish, JL Аз сироят то саратон: Чӣ гуна вирусҳои варами ДНК мубодилаи карбон ва липидҳои марказии ҳуҷайраро тағир медиҳанд.Маҳон, KL ва Parish, JL сирояти оташ ба саратон: чӣ гуна вирусҳои варами бар ДНК асосёфта мубодилаи карбон ва липидҳои марказии ҳуҷайраро тағир медиҳанд. Magon, KL & Parish, JL. Magon, KL & Parish, JL Аз сироят то саратон: чӣ гуна вирусҳои варами ДНК мубодилаи карбон ва липидҳои марказии ҳуҷайраро тағир медиҳанд.Маҳон, KL ва Parish, JL сирояти саратонро оташ мезанад: чӣ гуна вирусҳои варами ДНК мубодилаи марказии карбон ва липидҳоро дар ҳуҷайраҳои мизбон тағир медиҳанд.Биологияи кушод.11, 210004 (2021).
Коррейа да Коста, JM ва дигарон.Эстрогенҳои катехол аз шистосомаҳо ва ҷигарҳои ҷигар ва саратони бо гельминт алоқаманд.пеш.дарун гарм.5, 444 (2014).