Giardia duodenum як организми паразитӣ мебошад, ки боиси лямблиоз, сирояти рӯда мебошад, ки махсусан дар кӯдакони хурдсол бо аломатҳои клиникии дарунравӣ маъмул аст.Мо қаблан хабар дода будем, ки G. duodenalis берун аз ҳуҷайра фаъолсозии нуклеотидҳои ҳатмии ретсептори олигомеризатсияи дохили ҳуҷайра 3 (NLRP3) -ро ба вуҷуд меорад ва аксуламали илтиҳобии мизбонро тавассути секретсияи весикулҳои берун аз ҳуҷайра (EV) танзим мекунад.Аммо, намунаҳои дақиқи молекулавии EV duodenococcal EV (GEV) бо патоген алоқаманд дар ин раванд ва нақши илтиҳоби NLRP3 дар лямблиаз то ҳол равшан карда мешаванд.
Плазмидҳои экспрессияи рекомбинати эукариотики pcDNA3.1(+)-alpha-2 ва alpha-7.3 giardins дар GEV сохта шуда, ба макрофагҳои ибтидоии перитонеалии муш трансфексия карда шуданд ва тавассути ченкунии молекулаи илтиҳоби илтиҳоби каспас-1 муайян карда шуданд.Сатҳи ифодаи p20 тафтиш карда шуд..Гиардинҳои G. duodenalis alpha-2 ва alpha-7.3 аслан тавассути чен кардани inflammasome NLRP3 (NLRP3, pro-interleukin-1 beta [IL-1β], pro-caspase-1 ва caspase-1 p20), секретсияи IL муайян карда шуданд.Сатҳи 1β, сатҳҳои олигомеризатсияи сафедаи доғи апоптотикӣ (ASC) ва локализатсияи иммунофлуоресцентии NLRP3 ва ASC.Пас аз он нақши илтиҳоби NLRP3 дар патогении G. duodenalis бо истифода аз мушҳо, ки дар онҳо фаъолшавии NLRP3 баста шуда буд (мушҳо басташудаи NLRP3) ва тағироти патологӣ дар вазни бадан, сарбории паразитҳои рӯдаи duodenalis ва бофтаи duodenalis назорат карда шуданд.Илова бар ин, мо таҳқиқ кардем, ки оё хиардинҳо алфа-2 ва алфа-7.3 секрецияи IL-1β-ро дар vivo тавассути илтиҳоби NLRP3 ба вуҷуд меоранд ва нақши ин молекулаҳоро дар патогении G. duodenalis дар мушҳо муайян кардем.
Алфа-2 ва алфа-7,3 лямбардҳо ба фаъолсозии илтиҳоби NLRP3 дар in vitro мусоидат мекунанд.Ин ба фаъолшавии p20 caspase-1, афзоиши сатҳи экспрессияи сафедаҳои NLRP3, pro-IL-1β ва pro-caspase-1, афзоиши назарраси секретсияи IL-1β, ташаккули нуқтаҳои ASA дар цитоплазма ва индуксияи олигомеризатсияи ASA.Илтиҳоби NLRP3 Нобудшавии penis патогении G. duodenalisро дар мушҳо шадидтар мекунад.Мушҳое, ки бо кистаҳо тавассути гаваҷ аз мушҳои басташудаи NLRP3 табобат карда шуданд, шумораи афзояндаи трофозоитҳо ва осеби шадиди виллии duodenal, ки бо криптҳои некротикӣ бо хурдшавӣ ва шохаҳо хосанд, нишон доданд.Таҷрибаҳои in vivo нишон доданд, ки лямардҳои алфа-2 ва алфа-7,3 метавонанд секрецияи IL-1β-ро тавассути илтиҳоби NLRP3 ба вуҷуд оранд ва эмкунӣ бо лямбардҳои алфа-2 ва алфа-7,3 патогении G. duodenalis-ро дар мушҳо коҳиш медиҳад.
Якҷоя, натиҷаҳои ин таҳқиқот нишон медиҳанд, ки лямбли алфа-2 ва алфа-7.3 боиси болоравии илтиҳоби NLRP3-и мизбон ва коҳиш додани сирояти G. duodenalis дар мушҳо, ки ҳадафҳои умедбахши пешгирии лямблиоз мебошанд.
Giardia duodenum як паразити протозойи берун аз ҳуҷайра мебошад, ки дар рӯдаи борик зиндагӣ мекунад ва ҳамасола 280 миллион ҳолати лямблиазро бо дарунравӣ, бахусус дар байни кӯдакони хурдсол дар кишварҳои рӯ ба тараққӣ ба вуҷуд меорад [1].Одамон аз оби нўшокї ё хўроки бо кистањои М.-и дувоздањангушта олудашуда сироят ёфта, баъдан ба меъда даромада, бо шарбати меъда ихрољ мешаванд.Трофозоитҳои лямблияи duodenum ба эпителиуми рӯдаи дувоздаҳадаҳо пайваст шуда, боиси дилбеҷоӣ, қайкунӣ, дарунравӣ, дарди шикам ва кам шудани вазн мешаванд.Шахсони гирифтори норасоии масуният ва фибрози кистикӣ ба сироят дучор мешаванд.Инфексия инчунин метавонад тавассути алоқаи ҷинсӣ бо даҳон ва мақъад ба амал ояд [2].Доруҳо ба монанди метронидазол, тинидазол ва нитазоксанид вариантҳои афзалиятноки табобати сироятҳои duodenal мебошанд [3].Бо вуҷуди ин, ин доруҳои химиотерапия боиси таъсири манфии номатлуб ба монанди дилбеҷошавӣ, канцерогенез ва генотоксикӣ мешаванд [4].Аз ин рӯ, барои пешгирии сирояти G. duodenalis бояд стратегияҳои бештар муассир таҳия карда шаванд.
Илтиҳобҳо як синфи комплексҳои сафедаи ситозолӣ мебошанд, ки як қисми вокуниши модарзодии иммунӣ мебошанд, ки барои муҳофизат аз ҳамлаи патогенҳо ва миёнаравии аксуламалҳои илтиҳобӣ кӯмак мекунанд [5].Дар байни ин илтиҳобҳо, ретсептори олигомеризатсияи нуклеотидҳои ҳатмӣ (NOD) 3 (NLRP3) олигомеризатсияи нуклеотидҳои ҳатмӣ (NLRP3) ба таври васеъ омӯхта шудааст, зеро он метавонад тавассути шаклҳои гуногуни патоген/зарар ба момпкулярҳо/ПА ошкор карда шавад. DAMP), системаи иммунии модарзодро эътироф мекунад, фаъол мекунад.ва гомеостази рӯдаҳоро дар бисёр бемориҳои илтиҳобӣ танзим мекунад [6,7,8].Он аз ретсептори шинохти намуна (PRR) NLRP3, адаптер протеини доғдори апоптотикӣ (ASC) ва эффектори прокаспаза-1 ё прокаспаза-11 иборат аст.Илтиҳоби NLRP3 ҳамчун мизбон бар зидди ҳамлаи патоген амал мекунад, тавре ки дар Neospora caninum [9], Paracoccidioides brasiliensis [10] ва таҳқиқоти Leishmania мушоҳида шудааст.[11], аммо инчунин гузориш дода шудааст, ки фаъолсозии илтиҳоби NLRP3 аксуламали иммунии муҳофизатиро маҳдуд мекунад ва пешрафти бемориро, масалан, дар кирмҳо шадидтар мекунад [12].Дар асоси бозёфтҳои қаблии мо, мо хабар додем, ки G. duodenalis берун аз ҳуҷайра фаъолшавии дохили ҳуҷайраи илтиҳоби NLRP3-ро ба вуҷуд меорад ва вокунишҳои илтиҳобии мизбонро тавассути секретсияи весикулаҳои берун аз ҳуҷайра (EVs) модул мекунад [13].Бо вуҷуди ин, нақши inflammasome NLRP3 дар сирояти G. duodenalis in vivo муайян карда мешавад.
Лямбардинҳо дар ибтидо ҳамчун ҷузъҳои сохтории ситоскелети G. duodenalis тавсиф шуда, дар ҳаракати трофозоит ва пайвастшавии ҳуҷайраҳои эпителиалӣ дар рӯдаи борик нақши муҳим доранд.Барои беҳтар мутобиқ шудан ба муҳити зист ва баланд бардоштани патогении онҳо, trophozoites G. duodenalis сохтори беназири ситоскелетиро таҳия карданд, ки аз 8 парчам, 1 бадани миёна ва 1 диски ventral иборат аст [14].Трофозоитҳои Giardia duodenum аз ситоскелети худ истифода бурда, ба рӯдаҳои болоии борик, махсусан ба рӯдаи дувоздаҳададон дохил мешаванд ва ба энтероситҳо часпида мешаванд.Онҳо пайваста муҳоҷират мекунанд ва бо истифода аз мубодилаи ҳуҷайра ба ҳуҷайраҳои эпителиалӣ пайваст мешаванд.Аз ин рӯ, байни ситоскелети онҳо ва вирулентӣ робитаи зич вуҷуд дорад.Лямардҳое, ки барои Giardia duodenum хосанд, ҷузъҳои сохтори ситоскелет [15] буда, ба чаҳор синф тақсим мешаванд: α-, β-, γ- ва δ-лямбардҳо.21 нафар аъзои оилаи α-гиардин мавҷуданд, ки ҳамаи онҳо қобилияти пайваст кардани фосфолипидҳоро аз калсий доранд [16].Онҳо инчунин ситоскелетро бо мембранаи ҳуҷайра мепайванданд.Дар ашхоси гирифтори дарунравӣ, ки аз ҷониби G. duodenalis ба вуҷуд омадааст, α-гиардинҳо ҳангоми сироят хеле экспресс ва иммунореактивӣ доранд [17].Ваксинаҳои гетерологӣ дар асоси Giardia alfa-1 аз лямблиоз дар мушҳо муҳофизат карда шудаанд ва антигенҳои эҳтимолии номзад барои таҳияи ваксина мебошанд [18].Гиардини альфа-8, ки дар мембранаи плазма ва флагела ҷойгир шудааст, аммо на дар диски вентралӣ, ҳаракат ва суръати афзоиши трофозоитҳоро дар G. duodenalis зиёд мекунад [19].Гиардини Альфа-14 ба сохторҳои микронайчаҳо дар флагела пайваст шуда, ба мавҷудияти G. duodenalis таъсир мерасонад [20].Гиардини альфа-11 дар тамоми давраи ҳаёт ба таври фаровон мавҷуд аст ва аз ҳад зиёд экспресссияи лямбдини алфа-11 ба худи G. duodenalis зарар мерасонад [21].Аммо маълум нест, ки гиардини алфа-2 ва алфа-7,3 аз сирояти G. duodenalis ва механизмҳои аслии онҳо муҳофизат мекунанд ё не.
Дар ин тадқиқот, плазмидҳои экспрессияи рекомбинати эукариотики pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ва pcDNA3.1 (+)-alpha-7.3 giardine ба макрофагҳои ибтидоии перитонеалии муш барои фаъол кардани NLRP3 мизбон интиқол дода шуданд.Пас аз он ҳадафҳои илтиҳобӣ тафтиш карда шуданд.Мо инчунин нақши илтиҳоби NLRP3-ро дар патогении G. duodenalis арзёбӣ кардем, таҳқиқ кардем, ки оё алфа-2 ва алфа-7,3 лямбомасомаи NLRP3-ро дар in vivo ба вуҷуд меоранд ва муайян кардем, ки ин ду нақши лямбомасома дар патогении G. G. duodenalis.Ҳадафи умумии мо таҳияи ҳадафҳои ояндадор оид ба пешгирии сирояти G. duodenalis буд.
Навъи ваҳшӣ (WT) C57BL/6 мушҳои занонаи синнашон 5-8 ҳафта аз Маркази таҷрибавии ҳайвоноти Лиаонин Чангшен (Ляонин, Чин) харида шудаанд.Мушҳо ба об дастрасии ройгон доштанд, ғизои стерилизатсияро гирифтанд ва дар давраи 12/12 соат равшанӣ/торик нигоҳ дошта мешуданд.Пеш аз сироят, мушҳо антибиотикҳоро дар оби нӯшокӣ бо иловаи ампициллин (1 мг/мл), ванкомицин (1 мг/мл) ва неомицин (1,4 мг/мл) гирифтанд (ҳама аз Шанхай, Чин, организмҳои сунъӣ харида шудаанд) [22] ].].Мушҳо, ки қобилияти хӯрдан ва нӯшиданро дар тӯли зиёда аз 24 соат аз даст додаанд ва ≥ 20% вазни баданро гум кардаанд, бо роҳи вайроншавии гарданаки бачадон эвтаниз карда шуданд.
Трофозоитҳои WB G. duodenalis (Culture Type Culture Collection, Манасас, ИМА) бо 12,5% хунобаи гови ҳомила (FBS; Every Green, Zhejiang, China) ва 0,1% сафраи гов (Сигма-Олдрих, Сент Миссури, ИМА) илова карда шуданд. ).ИМА) дар шароити микроаэробӣ.Трофозоитҳои омехта дар ях ҷамъоварӣ карда шуданд ва барои такрористеҳсоли минбаъда бо таносуби 1: 4 гузаранд.
Кистаҳои гиардияи дувоздаҳгона тавре ки қаблан тавсиф шуда буданд, ба вуҷуд оварда шуданд [23], трофозоитҳо дар марҳилаи логарифмӣ ҷамъоварӣ карда шуданд ва сипас бо муҳити индуксионии инкапсуляция, рН 7.1 (тағир додашудаи TYI-S-33) то консентратсияи ниҳоии 1 × 106 трофозоит/мл омехта карда шуданд.консентратсияи сафро 0,05% миёна).Трофозоитҳо дар шароити анаэробӣ дар ҳарорати 37 ° C то давраи афзоиши логарифмӣ парвариш карда шуданд.Муњитро ба муњити индуксионии киста (рН 7,8; ​​муњити таѓйирёфтаи TYI-S-33 бо консентратсияи 1% сафро) ва культивацияи G. duodenalis дар ҳарорати 37°С дар давоми 48-96 соат иваз намоед, ки дар давоми он кистањо дар зери микроскоп мушоњида карда шуданд.Пас аз он ки аксарияти трофозоитҳо ба ташаккули кистаҳо водор шуданд, омехтаи фарҳангӣ ҷамъоварӣ карда шуд ва дар оби стерилизатсияи деионизатсияшуда дубора суспензия карда шуд, то трофозоитҳои боқимонда лизи карда шавад.Кистаҳо ҳисоб карда шуданд ва дар 4 ° C барои таҳлилҳои минбаъда тавассути найчаи меъда дар мушҳо нигоҳ дошта шуданд.
Весикулаҳои берун аз ҳуҷайраҳои гиардия (GEVs) тавре ки қаблан тавсиф шуда буд, бой карда шуданд [13].Трофозоитҳо дар марҳилаи афзоиши логарифмикӣ дар муҳити тағирёфтаи TYI-S-33, ки бо FBS-и аз экзосома камкардашуда омода карда шудаанд (Биологии Индустрис, Бейт-Хаемек, Исроил) то консентратсияи ниҳоии 1 × 106 паразит/мл дубора боздошта шуданд ва барои 12 соат инкубатсия карда шуданд.бо центрифуга дар 2000 г дар давоми 10 дақиқа, 10,000 г барои 45 дақиқа ва 100,000 г барои 60 дақиқа аз супернатанти фарҳанг ҷудо карда шуданд.Преципитатҳо дар шӯри фосфати буферӣ (PBS) гудохта шуда, бо истифода аз маҷмӯаи таҳлили сафедаи BCA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ИМА) миқдорашон муайян карда шуданд ва дар -80°C нигоҳ дошта шуданд ё бевосита барои таҳлилҳои минбаъда истифода шуданд.
Макрофагҳои ибтидоии перитонеалии муш, тавре ки қаблан тавсиф шуда буд, омода карда шуданд [24].Мухтасар, мушҳо (6-8 ҳафта) бо 2,5 мл маводи тиогликоли моеъи 2,98% Difco (BD, Franklin Lakes, NJ, ИМА) ворид карда шуданд (дар дохили перитонеалӣ [ip]) ва ба 3-4 тамоку ғизо доданд.Пас аз эвтаназия аз холигии шиками мушҳо суспензияи макрофагҳо ҷамъоварӣ карда шуд ва 3 маротиба дар 1000 г барои 10 дақиқа центрифуга карда шуд.Ҳуҷайраҳои ҷамъовардашуда тавассути цитометрияи ҷараён бо истифода аз аломати CD11b то он даме, ки тозагии ҳуҷайра >98% буд, ошкор карда шуданд, сипас ба лавҳаҳои фарҳанги ҳуҷайраҳои 6-чоҳ (4,5 x 106 ҳуҷайра/чоҳ) илова карда шуданд ва бо 10% FBS (Bioindustry) дар 37°C инкубатсия карда шуданд.ва 5% CO2.
РНК аз 1 × 107 трофозоит дар 1 мл реагенти TRIzol (Vazyme, Нанҷинг, Чин), ДНК геномӣ аз РНК G. duodenalis бо истифода аз MonScript dsDNase (Монад, Вуҳан, Чин) истихроҷ карда шуд ва ДНК комплементарӣ (cDNA) синтез карда шуд. бо истифода аз MonScript RTIIII Super Mix (Monad) мувофиқи дастурҳои истеҳсолкунанда.
Маълумот дар бораи пайдарпайии CDS барои гени мақсадноки G. duodenalis аз NCBI GenBank гирифта шудааст.Primer 5.0-ро барои тарҳрезии праймерҳои мушаххаси клонкунии бефосила барои ҳар як гени мавриди ҳадаф истифода баред.Примери пеш (5′-3′) аз се қисм иборат аст: пайдарпаии такрорӣ бо вектори хаттӣшудаи pcDNA3.1(+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) ва кодонҳои ATG ва GNN оғоз (агар пойгоҳи аввал G набошад).Ин барои баланд бардоштани самаранокии ифода анҷом дода мешавад.Илова бар ин, ҳадди аққал 16 bp асосҳои омехта (мазмуни GC 40-60% / Tm тақрибан 55 °C).Праймери баръакс (5′-3′) аз ду қисм иборат аст, пайдарпаии такрорӣ бо вектори хаттии EcoRV pcDNA3.1(+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) ва пойгоҳи якҷояи ҳадди аққал 16 bp.(ба гайр аз ду истгохи охир).асосҳо) кодон ба монанди АА ё GA барои имкон додани плазмидҳои рекомбинантӣ барои ифода кардани сафедаҳои нишондодашудаи худ).Пайдарпаии ибтидоӣ дар ҷадвали 1 оварда шудаанд ва аз ҷониби Kangmet Biotechnology Co., Ltd. (Чанчун, Чин) синтез карда шудаанд.
Ҳадафҳо бо истифода аз полимеразаи Pfu DNA (Тянген, Пекин, Чин) ё Ex-taq (Takara Biomedical Technology [Beijing] Co., Ltd., Пекин, Чин) бо истифода аз cDNA-и G. duodenalis ҳамчун қолаб омода карда шуданд.Плазми вектори ифодаи эукариотикии pcDNA3.1(+) бо ферменти маҳдудкунандаи EcoRV хаттӣ карда шуд ва бо истифода аз Fast AP (Thermo Fisher Scientific) дефосфоризатсия карда шуд.Фрагментҳои хаттии pcDNA3.1(+) ва порчаҳои генҳои ҳадафи пурқувват бо истифода аз маҷмӯаи тозакунии gel DNA (Тянген) тоза карда шуданд ва бо истифода аз Nanodrop ND-2000 (Thermo Fisher Scientific) миқдорашон муайян карда шуданд.Фрагменти pcDNA3.1(+) ва ҳар як порчаи гени мавриди ҳадаф бо истифода аз омехтаи клонкунии ягонаи MonClone (Monad Biotech Co., Ltd., Сучжоу, Чин) дубора муттаҳид карда шуд ва бо пайдарпайии ДНК бо истифода аз Comate Bioscience Company Limited (Чанчун, Чин) тасдиқ карда шуд..
Плазмидҳои бе эндотоксин pcDNA3.1(+)-alpha-2 ва pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 бо истифода аз маҷмӯаи Mini Plasmid SanPrep (Sangon Biotech) бе эндотоксин тавлид карда шуданд.Консентратсияи зиёда аз 500 нг/мкл нигоҳ дошта шуд, то боварӣ ҳосил кунад, ки EDTA дар буфери элютсионӣ ба таҳлили интиқол халал нарасонад.Макрофагҳои перитонеалии ибтидоии муш дар лавҳаҳои 6-чоҳ бо муҳити мукаммали RPMI 1640 (Biological Industries) барои 12 соат парвариш карда шуданд, сипас ҳуҷайраҳо 3 маротиба дар PBS гарм шуста шуданд, то пенициллин ва стрептомицин хориҷ карда шаванд ва сипас дар муҳити мукаммал пур карда шуданд.Плазмидҳои бе эндотоксин pcDNA3.1(+)-alpha-2 ва pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (2.5 мкг) дар 125 мкл муҳити камшудаи хунобаи Opti-MEM (Gibco, Thermo Fisher Scientific) маҳлул карда шуданд..Сипас 5 мкл реагенти трансфексионии Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) дар 125 мкл муҳити пасти зардоби Opti-MEM маҳлул карда шуд.Маҷмӯаҳои липосома-ДНК-ро бо омехта кардани плазмиди бе эндотоксин ҳалшуда бо Lipofectamine 2000 омода кунед ва имкон диҳед, ки омехта дар ҳарорати хонагӣ барои 5 дақиқа истода бошад.Комплексхоро алохида-алохида ба хучайрахои хар як чох гузаронед ва охиста омехта кунед.Пас аз 4 соат, муњити парвариши ҳуҷайра бо 2 мл муњити мукаммали RPMI 1640 иваз карда шуд ва парвариш барои 24 соат идома ёфт.Ба ҳуҷайраҳо муҳити тару тозаи парвариши ҳуҷайра илова карда шуд ва вобаста ба тарҳи таҳлил барои нуқтаҳои гуногуни вақт инкубатсия карда шуд.
Намунаҳои сафеда аз супернатантҳо ва лизатҳои ҳуҷайра тавре омода карда шуданд, ки қаблан тавсиф шуда буд [25].Параметрҳои интиқоли мембрана барои pro-IL-1β, pro-caspase-1, caspase-1 p20, NLRP3, β-актин ва His-tag 200 мА/90 дақиқа буданд.Барои interleukin 1β (IL-1β; R&D Systems, Миннеаполис, Миннесота, ИМА), каспаза-1 (p20) (Adipogen, Швейтсария) ва NLRP3 (Adipogen SA, Epalinges, Швейтсария) ва 1:5000 ҳадафи S tagenci (Amtiflety) Вуҳан, Чин) ва β-актин (Proteintech, Вуҳан, Чин).
Пайвастшавӣ бо дискцинимид (DSS) тавре ки қаблан тавсиф шуда буд, анҷом дода шуд [26].Ҳуҷайраҳо 3 маротиба бо PBS хунук шуста шуданд ва бо сӯзани 27 гауҷ дар буфери реаксияи 50 мкл ASC (pH 8.0), ки дорои 25 mM Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES ва 125 mM NaHCO3 мебошад, пурра лиз карда шуданд.Омехта дар 5000 г барои 3 дақиқа центрифуга карда шуд ва пеллет бо 10 мкл DSS (25 мМ дар DMSO) ва буфери реаксияи 40 мкл ASC барои 30 дақиқа дар 37 ° C дӯхта шуд.Пас аз центрифуга дар 5000 г барои 10 дақиқа, пеллет дар маҳлули 40 мкл буфери реаксияи ASC ва 10 мкл буфери боркунии сафедаи 6х (TransGen, Пекин, Чин) гудохта шуд ва сипас маҳлул дар ҳарорати хонагӣ барои 15 дақиқа хомӯш карда шуд. дақ., Сипас 10 дақиқа напазед.Пас аз он, намунаҳои сафеда бо истифода аз антителоҳои ибтидоии зидди ASC (Ванлейбио, Шенян, Чин) бо таносуби 1:500 ба blotting ғарбӣ гузаронида шуданд.
Пас аз тартиби қаблан тавсифшуда [13], супернатантҳои фарҳанги ҳуҷайра ҷамъоварӣ карда шуданд ва секретсияи ситокини зидди илтиҳобии IL-1β бо истифода аз маҷмӯаи ELISA муши IL-1 Beta (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) муайян карда шуд.Бо истифода аз каҷи стандартии IL-1β арзишҳои OD450nm-ро ба консентратсияи сафедаҳо табдил диҳед.
Ҳуҷайраҳое, ки дар рӯйпӯшҳо пӯшонида шудаанд, 3 маротиба дар PBS гарм шуста, дар фиксатори ҳуҷайраҳои матоъ (Biosharp, Пекин, Чин) барои 10 дақиқа дар ҳарорати хонагӣ (RT), дар 0,1% Triton X-Permeabilize дар 100 (дар PBS маҳлул карда шудаанд; Biosharp) ) барои 20 дақиқа дар ҳарорати хонагӣ ва дар 5% альбумини хунобаи гов (дар PBS) барои 2 соат дар ҳарорати хонагӣ блок кунед.Пас аз он ҳуҷайраҳо дар як шабонарӯз дар 4°C бо антителоҳои ибтидоӣ бар зидди ASC (1:100 маҳлул) ё NLRP3 (1:100 маҳлул) ва Cy3 бо нишони бузҳои зидди харгӯш IgG (H+L) (1:400; EarthOx) инкубатсия карда шуданд. , Сан-Франсиско, CA, ИМА) ё бузҳои бо FITC конъюгатшудаи зидди муш IgG (1:400; Earthox) шабона дар 37°C дар торикӣ барои 1 соат.Ядроҳо бо Hoechst 33258 (10 мкг/мл; UE, Сучжоу, Чин) дар давоми 5 дақиқа ранг карда шуданд ва дар зери микроскопи флуоресцентӣ (Корпоратсияи Olympus, Токио, Ҷопон) мушоҳида карда шуданд.
Мушҳо ба чор гурӯҳ тақсим шуданд (n = 7 дар ҳар як гурӯҳ): (i) Гурӯҳи назорати манфии бо PBS муолиҷашуда (танҳо PBS; гаваж 100 мкл/PBS PBS ва пас аз 3 соат пас аз тазриқи дохили перитонеалӣ 100 мкл/муш PBS)., пайваста барои 7 рӯз);(ii) гурӯҳи назорати манфие, ки бо ингибитори MCC950 табобат карда шудааст [27] (100 мкл/муш тавассути гаважи PBS, 3 соат баъд, 10 мг/кг вазни бадан [BW] MCC950 [дар PBS] ҳар рӯз ба дохили перитоналӣ ворид карда шуд, давомнокии 7 рӯз);(iii) G. duodenalis гурӯҳи сирояти кистаҳо (1,5 x 106 кистаҳо / муш тавассути гаваж, 3 соат пас, 100 мкл / муш PBS ҳар рӯз дар давоми 7 рӯз ворид карда мешавад);(iv) G. duodenalis кистаи сирояти якҷояи гурӯҳи табобати ингибитори MCC950 (1,5 × 106 киста / муш тавассути гаваж, 10 мг / кг вазни бадан MCC950 дар дохили перитоналӣ ҳар рӯз барои 7 рӯз дар 3 соат).Вазни бадани ҳар як муш ҳар рӯз назорат карда шуд ва ҳама мушҳо дар рӯзи 7-ум эвтаниз карда шуданд.Рудаи duodenalis ҳосилшуда (дарозиаш 3 см) дар 1 мл PBS ба қисмҳои хурд бурида шуд, кистаҳо як шабонарӯз дар PBS дар ҳарорати 4 ° C нобуд карда шуданд ва G. duodenalis trophozoites.Барои ранг кардани гематоксилин ва эозин (H&E) рӯдаи дувоздаҳи бартари тару тоза (дарозиаш 1 см) ҷудо карда шуд.
Мушҳо ба ду гурӯҳ тақсим шуданд: (i) гурӯҳи назорати MOCK ва (ii) гурӯҳи ингибитори MCC950.Дар ҳар як гурӯҳ панҷ табобат вуҷуд дошт (n = 7/гурӯҳи табобат): (i) Гурӯҳи назорати манфии табобати PBS (танҳо PBS; 100 мкл/ПБС муш, тазриқи дохили мушакӣ (IM) (tibialis anterior) [28, 29] ;( ii) pcDNA3.1(+) гурӯҳи назорати манфии плазмидӣ (100 мкг/ДНК муш, тавассути сӯзандоруи дохилимушакӣ) (iii) гурӯҳи назорати мусбии кистаи duodenalis (1,5 x 106 киста/муш, тавассути гаваж) (iv) a гурӯҳе, ки бо плазмиди pcDNA3.1(+)-alpha-2 (100 мкг/ДНК муш, тавассути сӯзандору ба дохили мушакҳо) ва (v) гурӯҳе, ки бо плазмиди pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (100 мкг/муш) коркард шудааст. ДНК, пас аз 12 соати гузар, мушҳо дар гурӯҳи ингибитори MCC950 дар тӯли 7 рӯз як сӯзандоруи дохилипардаии MCC950 (10 мг/кг вазни бадан) гирифтанд, дар ҳоле ки мушҳо дар гурӯҳи MOCK ҳаҷми баробари табобати PBS гирифтанд. Намунаҳои хун гирифта шуданд. аз мушҳои чашм ҷамъоварӣ карда шуда, дар як шабонарӯз дар 4 °C гузошта шудаанд, намунаҳои хуноба бо истифода аз таҳлили иммуносорбенти ферментӣ (ELISA) ва ченкунии сатҳи IL-1β ҷудо карда шуданд.
35 муш ба панҷ гурӯҳ тақсим карда шуд (n = 7 / гурӯҳ).Гурӯҳи 1 як гурӯҳи назорати манфии бо PBS табобатшуда буд: мушҳо 100 мкл PBS-ро ба дохили мушакҳо ва 3 рӯз пас аз гаваж гирифтанд.Гурӯҳи 2 як гурӯҳи назоратии мусбӣ мебошад, ки бо кистаҳои G. duodenalis сироят шудааст: мушҳо бо 100 мкл PBS сӯзандору ва пас аз 3 рӯз 1,5 x 106 киста/муш ба дохили меъда ворид карда шуданд.Гуруҳи сеюм – иммунизатсияи плазмидӣ бо pcDNA3.1(+) дар якҷоягӣ бо гурӯҳи назоратӣ барои сирояти кистаи duodenal: мушҳо 100 мкг плазми ДНК pcDNA3.1(+)(im) ба таври шифоҳӣ гирифтанд, 1,5×106 киста/муш 3 барои якчанд рӯз.Гуруххои 4 ва 5 плазмиди рекомбинатии pcDNA3.1(+)-альфа-2 гиардин ё плазми pcDNA3.1(+)-альфа-7.3 гиардини дар якҷоягӣ бо сирояти кистаи G. duodenalis буданд.Гурӯҳи таҷрибавӣ: мушҳо 100 мкг pcDNA3 гирифтанд.ДНК-и плазмиди 1(+)-гиардин (im), пас аз 3 рӯз, 1,5 × 106 киста/муш тавассути гаваж ворид карда шуд.Вазни бадани хар як муш баъди ба воситаи найча чорй кардани кистаи Г. duodenalis назорат карда шуд.Барои ченкунии сарбории паразитӣ ва таҳлили рангкунии HE рӯдаи дувоздаҳи барвақти тару тоза ҷамъоварӣ карда шуд.
Тағироти гистопатологӣ тибқи тартиби қаблан нашршуда таҳлил карда шуданд [30].Рудаи дувоздаҳ ҳуҷайраи тару тоза бо фиксатори ҳуҷайраҳои бофта, ба парафин дохил карда шуда, ба қисмҳои 4 мкм бурида, бо H&E ранг карда шуд ва дар зери микроскопи рӯшноӣ таҳлил карда шуд.Тағйироти патологии намояндагӣ дар ҳафт қисмати бофтаи ҳафт муши мустақил аз ҷониби як патологи бехабар аз табобат арзёбӣ карда шуд ва дар 200x васеъкунӣ сабт карда шуд.Дарозии вилли ва чуқурии криптҳо мувофиқи усулҳои қаблан тавсифшуда чен карда шуданд.
Натиҷаҳои in vitro ва in vivo дар се нусха ба даст оварда шуданд.Графикҳо бо истифода аз GraphPad Prism 7.00 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, ИМА) сохта шудаанд.Тафовут байни ду гурӯҳ тавассути t-тест, дар ҳоле ки фарқияти байни гурӯҳҳои ≥3 тавассути таҳлили яктарафаи дисперсия (ANOVA) бо истифода аз нармафзори SPSS (версияи 22.0; SPSS IBM Corp., Armonk, NY, ИМА) таҳлил карда шуд.Маълумот барои якхела будани дисперсия бо истифода аз санҷиши Левен ва пас аз санҷиши пост-хок Бонферрони (B) таҳлил карда шуд.Аҳамиятнокӣ бо P<0.05, P<0.01 ва P<0.001 (на аҳамиятнок [ns]) ифода карда мешавад (P>0.05).
Таҳлили қаблии мо дар бораи протеомикаи GEV дар Энсиклопедияи генҳо ва геномҳои Киото (KEGG) нишон дод, ки ҳадафҳои зиёде метавонанд дар фаъолсозии роҳҳои сигнализатсияи илтиҳобӣ ҷалб карда шаванд [13].Мо ду ҳадафи умедбахш, алфа-2 ва алфа-7,3 гиардинҳоро интихоб кардем, ин молекулаҳоро афзоиш медиҳем ва онҳоро барои сохтани вектори ифодаи эукариотики pcDNA3.1 (+) истифода мебарем.Пас аз секвенсия, плазмидҳои экспрессияи рекомбинатии pcDNA3.1(+)-альфа-2 ва алфа-7.3 лямбидӣ ба макрофагҳои ибтидоии перитонеалии муш трансфексия карда шуданд ва протеини имзои каспаза-1 p20 аз илтиҳоб (порчаи каспазаи фаъолшуда-1) муайян карда шуд. ҳамчун равшан кардани молекулаҳои калидӣ, ки метавонанд илтиҳобро ба вуҷуд оранд.Натиҷаҳо нишон доданд, ки лямбдинҳои алфа-2 ва алфа-7.3 метавонанд ифодаи p20 каспаза-1-ро ба GEV монанд кунанд.Дар назорати манфии табобатнашуда (танҳо PBS) ва назорати плазми pcDNA3.1 (+) ягон таъсир ба фаъолсозии каспаза-1 ёфт нашуд (Расми 1).
Андозагирии фаъолсозии p20 caspase-1 тавассути pcDNA3.1 (+) -альфа-2 ва алфа-7.3 гиардинҳо.Плазмидҳои экспрессияи рекомбинатии эукариотики pcDNA3.1(+)-альфа-2 ва алфа-7,3 лямардҳо (болотар аз ҳар як хат) ба макрофагҳои ибтидоии перитонеалии муш интиқол дода шуданд ва супернатантҳои фарҳанг пас аз 24 соат ҷамъоварӣ карда шуданд.Блотинги ғарбӣ барои чен кардани сатҳи ифодаи протеини илтиҳобии каспаза-1 p20 истифода шуд.Гурӯҳи танҳо табобати PBS (хати C) ва гурӯҳи монотерапияи pcDNA3.1 (+) (pcDNA3.1) ҳамчун назорати манфӣ истифода шуданд ва гурӯҳи табобати GEV ҳамчун назорати мусбӣ истифода шуданд.Ифодаи протеини рекомбинантӣ тавассути ошкор кардани теги гистидин дар ҳар як сафеда тасдиқ карда шуд ва бандҳои сафедаи пешбинишуда алфа-2 гиардин (38,2 кДа) ва алфа-7,3 гиардин (37,2 кДа) буданд.GEV, весикулаҳои ғайриҳуҷайравии Giardia duodenum, pcDNA3.1 (+), вектори хаттии EcoRV, SUP, supernatant
Барои муайян кардани он, ки оё алфа-2 гиардин ва алфа-7.3 гиардин экспрессияи p20 каспаза-1-ро ба вуҷуд меоранд ва дар фаъол кардани вокуниши илтиҳобии мизбон NLRP3, pcDNA3.1 (+) - алфа-2 гиардин ва pcDNA3.1 (+) - алфа нақш мебозанд. -7.3 гиардин ба макрофагҳои ибтидоии перитонеалии муш бо ДНК-и плазмиди рекомбинантӣ интиқол дода шуд ва сатҳҳои ифода, локализатсия ва олигомеризатсияи сафедаҳои асосии илтиҳобии NLRP3 муайян карда шуданд.Дар ин таҷриба, GEV ҳамчун гурӯҳи назоратии мусбӣ истифода шуд ва гурӯҳи бидуни табобат (танҳо PBS) ё гурӯҳи табобати трансфексияи pcDNA3.1 (+) гурӯҳи манфӣ буд.Натиҷаҳо нишон доданд, ки мисли гурӯҳи GEV, ДНК-и плазмиди рекомбинатии giardin pcDNA3.1(+)-alpha-2 ва giardin pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 боиси болоравии NLRP3, pro-IL-1β ва фаъолшавии прокаспаза-1 ва каспаза-1 (расми 2а).Илова бар ин, ҳарду лямблиҳо секрецияи назарраси IL-1β-ро ба вуҷуд оварданд (pcDNA3.1: ANOVA, F(4, 10) = 1,625, P = 0,1000; алфа-2 гиардина: ANOVA, F (4, 10) = 1,625, P = 0,000 ).;алфа-7,3 гиардин: ANOVA, F (4, 10) = 1,625, P <0,0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1,625, P = 0,0047) (Расми 2б).Аксари сафедаҳои ASC дар гурӯҳи бидуни табобат ё дар гурӯҳи табобатӣ, ки бо плазмиди pcDNA3.1 (+) трансфексия карда шудаанд, дар муқоиса бо pcDNA3.1 (+) - алфа-2 ё pcDNA3.1 (+) - алфа-, мономерӣ буданд. 7,3 лямдин.Олигомеризатсияи ASC дар ДНК-и плазмиди рекомбинатии гурӯҳ ё гурӯҳи назоратии мусбати GEV ба амал омад, ки шакли олигомериро нишон медиҳад (расми 2c).Ин маълумотҳои пешакӣ нишон медиҳанд, ки гиардини алфа-2 ва алфа-7,3 метавонанд фаъолшавии илтиҳоби NLRP3-ро ба вуҷуд оранд.Тадқиқотҳои минбаъдаи иммунофлуорессент оид ба маҳалли ҷойгиршавии ASC ва NLRP3 нишон доданд, ки дар гурӯҳи назорати манфӣ, протеини ASC дар тамоми ситоплазма пароканда шуда, ҳамчун сигнали нуқта ҳангоми ангезиши pcDNA3.1(+)-alpha-2 бо гиардин ё pcDNA3 пайдо мешавад.1 (+) -алфа-7,3 гурӯҳи гиардин ё гурӯҳи назоратии мусбати GEV (Расми 2d).Дар гурӯҳҳои назорати манфӣ ва бо плазмид коркардшудаи pcDNA 3.1, сигнали сафедаи NLRP3 ошкор карда нашуд, дар ҳоле ки нуқтаи сигнали флуоресцентӣ дар посух ба pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ё pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 ошкор карда шуд..лямдин дар ситоплазма ё ҳангоми ангезиши ВНБ пайдо мешаванд (расми 2е).Ин маълумотҳо минбаъд нишон медиҳанд, ки G. duodenalis giardin alpha-2 ва giardin alpha-7.3 илтиҳоби NLRP3-ро дар макрофагҳои ибтидоии перитонеалии муш фаъол мекунанд.
pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin ва pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin илтиҳоби NLRP3-ро дар макрофагҳои перитонеали муш фаъол мекунанд.Плазмидаҳои экспрессияи рекомбинати эукариотикии pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin ва pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin ба макрофагҳо ва ҳуҷайраҳои ибтидоии перитонеалии мурин трансфексия кунед ё супернатантро дар давоми 24 соат барои таҳлили экспрессия, олигомеризатсия ҷамъ кунед. , секреция.ва маҳаллисозии сафедаҳои асосии илтиҳобӣ.Гурӯҳи танҳо PBS (C) ва гурӯҳи ягонаи табобати pcDNA3.1 (+) ҳамчун назорати манфӣ истифода шуданд ва гурӯҳи табобати GEV ҳамчун гурӯҳи мусбӣ истифода шуданд.Протеинҳои асосии илтиҳобии NLRP3, аз ҷумла NLRP3, pro-IL-1β, pro-caspase-1 ва p20 caspase-1, тавассути blotting ғарбӣ муайян карда шуданд.b Сатҳи секрецияи IL-1β дар супернатантҳо бо истифода аз таҳлили иммуносорбенти бо фермент алоқаманд (ELISA) муайян карда шуд.Тафовут байни гурӯҳҳои назоратӣ ва таҷрибавӣ тавассути таҳлили яктарафаи дисперсия (ANOVA) бо истифода аз версияи нармафзори SPSS 22.0 таҳлил карда шуд.Ситорачаҳо фарқияти назаррасро байни гурӯҳҳо **P<0,01 ва ***P<0,001 нишон медиҳанд.в Сатҳи олигомеризатсияи ASC дар пеллетҳо тавассути таҳлили байнипайвандии DSS муайян карда шуд, дар ҳоле ки сатҳи ASC дар лизатҳои ҳуҷайра ҳамчун назорати боркунӣ истифода мешуд.d Намоиши маҳаллисозии ISC бо истифода аз иммунофлуоресцент.e Иммунофлуоресцент барои визуализатсияи маҳаллисозии NLRP3 истифода шуд.ASC, сафедаи апоптотикӣ ба доғ монанд;ИЛ, интерлейкин;NLRP3, ретсептори олигомеризатсияи ба нуклеотид-пайвастшаванда 3;ns, муҳим нест (P > 0,05)
Ҳам G. duodenalis ва ҳам GEVs, ки он ҷудо мекунад, илтиҳоби NLRP3-ро фаъол мекунанд ва аксуламали илтиҳобии мизбонро дар vitro танзим мекунанд.Ҳамин тариқ, нақши inflammasome NLRP3 дар патогении G. duodenalis норавшан боқӣ мемонад.Барои таҳқиқи ин масъала, мо озмоишеро байни мушҳои мубталои кистаи G. duodenalis ва мушҳои мубталои кистаи G. duodenalis + муолиҷаи ингибитори MCC950 тарҳрезӣ кардем ва ифодаи илтиҳобии NLRP3-ро ҳангоми мубталои кистаи G. duodenalis муқоиса кардем.Схемаи муфассали тачриба дар расми 3а нишон дода шудааст.Тағйироти вазни бадани мушҳо дар гурӯҳҳои гуногуни табобат дар тӯли 7 рӯз пас аз сироят бо кистаҳо назорат карда шуданд ва натиҷаҳо дар расми 3б нишон дода шудаанд.Дар муқоиса бо гурӯҳе, ки бо PBS пок табобат карда шудааст, натиҷаҳо нишон доданд, ки (i) вазни бадани мушҳои гирифтори кистаи G. duodenalis аз рӯзи 3 то рӯзи 7 пас аз сироят коҳиш ёфт;(ii) табобат бо ингибитори MCC950 ба вазни бадани мушҳо таъсири назаррас надошт..Дар муқоиса бо як гурӯҳи сироятӣ, BW гурӯҳи сирояти рӯдаи duodenal, ки бо MCC950 табобат карда шудааст, ба дараҷаҳои гуногун коҳиш ёфт (Рӯзи 1: ANOVA, F(3, 24) = 1,885, P = 0,0148; Рӯзи 2: ANOVA, F(3, 24) ) = 0,4602, Р<0,0001 Рӯзи 3: ANOVA, F(3, 24) = 0,8360, P = 0,0010: ANOVA, F(3, 24) = 1,683, P = 5, NO (3, 24) = 0,6497, P = 0,0645; Рӯзи 6: ANOVA, F (3, 24) = 5,457, P = 0,0175; Рӯзи 7: ANOVA, F (3, 24) = 2,893, P = 0,0202).Ин маълумотҳо нишон медиҳанд, ки илтиҳоби NLRP3 мушҳоро аз талафоти назарраси вазн дар марҳилаҳои аввали (2-4 рӯз) сирояти рӯдаи duodenal муҳофизат мекунад.Пас аз он мо мақсад доштем, ки трофозоитҳои G. duodenalis дар моеъи шустани рӯдаи duodenalis ошкор карда шаванд ва натиҷаҳо дар расми 3c нишон дода шудаанд.Дар муқоиса бо гурӯҳи сирояти кистаи G. duodenalis, шумораи трофозоитҳо дар рӯдаи duodenalis пас аз бастани илтиҳоби NLRP3 (t(12) = 2.902, P = 0.0133) хеле зиёд шуд.Бофтаҳои рӯдаи duodenalis, ки бо HE ранг карда шудаанд, дар муқоиса бо назорати манфие, ки танҳо бо PBS ва MCC950 табобат карда шудаанд, нишон доданд: (i) сирояти кистаи G. duodenalis боиси осеби виллии duodenalis гардид (ANOVA, F(3, 24) = 0.4903, P = 0.0488 ) ва атрофияи криптӣ (ANOVA, F(3, 24) = 0,4716, P = 0,0089);(ii) рӯдаи duodenalis аз мушҳое, ки бо кистаҳои G. duodenalis сироят шудаанд ва бо ингибиторҳои MCC950 табобат карда шудаанд.villi duodenal duodenal осеб ва мурда буданд (ANOVA, F(3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) бо атрофия ва шохаҳои крипт (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (Расми 3d- е) .Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки илтиҳоби NLRP3 дар коҳиш додани патогении G. duodenalis нақш мебозад.
Нақши inflammasome NLRP3 дар сирояти Giardia duodenum.Мушҳо бо кистаҳои duodenococcal гаваҷ карда шуданд (iv) ва сипас бо MCC950 (ip) ё бе он табобат карда шуданд.Гурӯҳҳои ягонаи табобатӣ бо PBS ё MCC950 ҳамчун назорат истифода шуданд.Гурӯҳи таҷрибавӣ ва режими табобат.б Вазни бадани мушҳо дар ҳар як гурӯҳҳои гуногуни табобат барои 7 рӯз назорат карда шуд.Фарқи байни гурӯҳи сироятии G. duodenalis ва гурӯҳи табобати сирояти G. duodenalis + MCC950 тавассути t-test бо истифода аз версияи нармафзори SPSS 22.0 таҳлил карда шуд.Ситорачаҳо фарқиятҳои назаррасро дар *P<0.05, **P<0.01 ё ***P<0.001 нишон медиҳанд.в Сарбории паразитӣ бо роҳи ҳисоб кардани миқдори трофозоитҳо дар моеъи шустани рӯдаи дувоздаҳанагӣ муайян карда шуд.Фарқи байни гурӯҳи сироятии G. duodenalis ва гурӯҳи табобати сирояти G. duodenalis + MCC950 тавассути t-test бо истифода аз версияи нармафзори SPSS 22.0 таҳлил карда шуд.Ситорачаҳо фарқияти назаррасро дар *P <0,05 нишон медиҳанд.г Натиҷаҳои рангкунии гематоксилин ва эозин (H&E) аз гистопатологияи рӯдаи duodenal.Тирҳои сурх нишон медиҳанд, ки зарар ба villi, тирҳои сабз нишон медиҳанд, ки зарари криптҳо.Сатри миқёс: 100 мкм.e, f Таҳлили омории баландии виллуси duodenal ва баландии крипти муш.Ситорачаҳо фарқиятҳои назаррасро дар *P<0.05 ва **P<0.01 нишон медиҳанд.Натиҷаҳо аз 7 таҷрибаи мустақили биологӣ гирифта шудаанд.BW, вазни бадан;ig, роҳи интиқоли дохили меъда;ip, роҳи интиқоли дохили перитонеалӣ;ns, аҳамиятнок нест (P > 0,05);PBS, шӯри фосфатии буферӣ;ВТ, навъи ваҳшӣ
Секрецияи IL-1β як аломати фаъолшавии илтиҳоб мебошад.Барои муайян кардани он, ки оё гиардини G. duodenalis alpha-2 ва alpha-7.3 giardine in vivo inflammasome мизбони NLRP3-ро фаъол мекунад, мо мушҳои коркарднашудаи WT (гурӯҳи қаллобӣ) ва мушҳои NLRP3-ро бо илтиҳоби басташуда истифода кардем (гурӯҳи муолиҷаи монеъшудаи MCC950).Схемаи муфассали тачриба дар расми 4а нишон дода шудааст.Гурӯҳҳои таҷрибавӣ аз мушҳо иборат буданд, ки бо PBS, табобати кистаи G. duodenalis тавассути гаваҷ, тазриқи дохили мушакҳои pcDNA3.1 ва тазриқи дохили мушакҳои pcDNA3.1 (+) -алфа-2 гиардин ё pcDNA3.1-alpha-7.3.Дар рӯзи 7-уми пас аз ворид кардани дохили мушакҳои плазми рекомбинантӣ хуноба ҷамъоварӣ карда шуд ва сатҳи IL-1β дар ҳар як гурӯҳ муайян карда шуд.Тавре ки дар расми 4b нишон дода шудааст, дар гурӯҳи MOCK: (i) дар муқоиса бо гурӯҳи PBS, табобати pcDNA3.1 ба секретсияи IL-1β таъсири назаррас надошт (ANOVA, F (4.29) = 4.062, P = 0.9998), аммо, Секрецияи IL-β дар гурӯҳи кистаи G. duodenalis (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine ва pcDNA3 ба таври назаррас баланд шуд.1- Тазриқ ба дохили мушакҳои алфа-7,3 лямдин сатҳи зардоби IL-1β-ро ба таври назаррас зиёд кард (ANOVA, F(4, 29) = 4,062, P<0,0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-7,3 гиардин сатҳи баланди секрецияи IL-1β-ро дар гурӯҳи тазриқи дохили мушакҳои pcDNA3.1-alpha-2 гиардин ба вуҷуд овард (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P = 0.033) .Дар муқоиса бо ҳар як гурӯҳ дар гурӯҳи табобати MCC950 ва гурӯҳи MOCK: (i) сатҳи секретсияи IL-1β дар гурӯҳи назоратии PBS ва гурӯҳи назоратии pcDNA3.1 пас аз бастани ингибитори MCC950 то андозае коҳиш ёфт, аммо фарқият чунин набуд. назаррас (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) пас аз бастани MCC950., Секрецияи IL-1β дар гурӯҳи кистаи сироятшудаи G. duodenalis, гурӯҳи лямбдини pcDNA3.1-alpha-2 ва гурӯҳи лямбдини pcDNA3.1-alpha-7.3 (G. duodenalis: ANOVA, F(9) ба таври назаррас коҳиш ёфт. , 58) = 3,540, Р = 0,0120 лямбдин: ANOVA, F(9, 58) = 3,540, Р = 0,0447 pcDNA3,1-альфа-7,3 лямбдин: ANO5; ) = 3,540, Р = 0,0164).Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки гиардини алфа-2 ва алфа-7.3 дар фаъолсозии илтиҳоби NLRP3 дар vivo миёнаравӣ мекунанд.
pcDNA3.1(+)-лиардинҳо in vivo мизбони inflammasome NLRP3-ро фаъол мекунанд.Мушҳо бо экспрессияи рекомбинати эукариотикии плазми pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ё pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine иммунизатсия карда шуданд (IM) ва сипас бо MCC950 (ip; гурӯҳи MCC950) табобат карда шуданд ё не (гурӯҳи мукаммал). ).Гурӯҳи табобати PBS ё pcDNA3.1 (+) ҳамчун назорати манфӣ, гурӯҳи табобати кистаи G. duodenalis ҳамчун назорати мусбӣ истифода шудааст.Гурӯҳи таҷрибавӣ ва режими табобат.b Сатҳи хунобаи IL-1β дар мушҳо дар рӯзи 7 тавассути санҷиши ELISA чен карда шуд.Тафовут байни гурӯҳҳо дар гурӯҳи MOCK бо истифода аз яктарафаи ANOVA таҳлил карда шуданд ва фарқиятҳо байни гурӯҳи MOCK ва гурӯҳи MCC950 бо истифода аз t-test версияи нармафзори SPSS 22.0 таҳлил карда шуданд.Ситорачаҳо фарқияти назаррасро байни гурӯҳҳои табобатӣ дар гурӯҳи MOCK нишон медиҳанд, *P<0.05 ва ***P<0.001;Аломатҳои доллар ($) фарқияти назаррасро байни ҳар як гурӯҳ дар гурӯҳи MOCK ва гурӯҳи MCC950 дар P<0.05 нишон медиҳанд.Натичахои хафт тачрибаи мустакили биологи.i, сӯзандору ба дохили мушакҳо, ns, аҳамиятнок нест (P > 0,05)
Барои таҳқиқи таъсири фаъолсозии алфа-2 ва алфа-7,3 гиардини миёнаравии илтиҳоби мизбони NLRP3 ба сирояти G. duodenalis, мо мушҳои WT C57BL/6-ро истифода бурдем ва алфа-2 гиардин ва алфа-7,3 гиардинро сӯзандору кардем.плазмид ба дохили мушак, пас аз 3 руз ба воситаи найчаи меъдаи кистаи G. duodenalis ворид карда шуд, ки пас аз он мушҳо дар давоми 7 рӯз мушоҳида карда шуданд.Схемаи муфассали тачриба дар расми 5а нишон дода шудааст.Вазни бадани хар як муш хар руз чен карда шуда, намунахои бофтаи тару тозаи рудаи дувоздахум дар рузи 7-уми баъди ба воситаи найчаи меъда воридшуда гирифта шуда, шумораи трофозоитхо чен карда шуда, тагйироти гистопатологи мушохида карда шуд.Тавре ки дар расми 5b нишон дода шудааст, бо зиёд шудани вақти ғизо, BW мушҳо дар ҳар як гурӯҳ тадриҷан афзоиш ёфт.МТ-и мушҳо дар рӯзи 3-юм пас аз ба дохили меъда ворид кардани кистаҳои G. duodenalis кам шуда, баъд тадриҷан зиёд мешавад.Фаъолсозии inflammasome NLRP3, ки тавассути тазриқи дохили мушакҳои алфа-2 гиардин ва алфа7.3 гиардин ба таври назаррас коҳиш додани вазнро дар мушҳо коҳиш дод (Рӯзи 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 1. = 0 .9754 Рӯзи 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 лямбдин, ANOVA, F(4, 30)=1.399, P=0.9987 Рӯзи 2: pcDNA3.1-alpha-2 лямбдин, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.9979 Рӯзи 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409 Рӯзи 3: pcDNA3.1-alpha-2 giard, 4, 30) = 0.8222, P = 0.0262 Рӯзи 3: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.8222, P = 0.0083 Рӯзи 4: pcDNA3.1-VAgi, , F(4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, Рӯзи 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5620, P <0.0001, Рӯзи 5: pcDNA3.1-alp 2 гиардин, ANOVA, F(4,30) = 0,9728, P <0,0001 Рӯзи 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 лямбдин, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P <0.0001 Рӯзи 6: pc -D alpha-2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, Рӯзи 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;Рӯзи 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P<0.0001 Рӯзи 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, <0,0001).Сарбории паразитӣ дар рӯдаи duodenum баҳо дода шуд (расми 5в).Дар муқоиса бо назорати мусбати коркарднашуда ва гурӯҳи бо вектори холии pcDNA3.1 сӯзандору, шумораи трофозоитҳои G. duodenalis дар гурӯҳҳое, ки бо гиардини α-2 ва α-7,3 лямдин (pcDNA3.1-alpha) ворид карда шудаанд, ба таври назаррас коҳиш ёфт. -2 гиардин: ANOVA, F (3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 гиардин: ANOVA, F (3, 24) = 1.209, P <0.0001).Илова бар ин, гиардин алфа-7,3 дар мушҳо нисбат ба гиардин алфа-2 муҳофизаттар буд (ANOVA, F (3, 24) = 1,209, P = 0,0081).Натиҷаҳои рангкунии HE дар расм нишон дода шудаанд.5д-ф.Мушҳое, ки бо гиардини алфа-2 ва алфа-7,3 тазриқ карда шудаанд, дар муқоиса бо мушҳое, ки бо G. duodenalis сӯзандору ва мушҳое, ки бо G. duodenalis дар якҷоягӣ бо вектори холии pcDNA3 ворид карда шудаанд, осеби бофтаи duodenalis камтар доштанд, ки бо осеби виллус зоҳир мешуданд.(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 ё P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.46 = 0,0028 ё P = 0,0055) ва камшавии атрофияи криптӣ (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.470, P = 0.0264 ё P = 0.0158; pcDNA3.1-alphaine: ANOVA- , F (3, 24) = 1.470, P = 0.0371 ё P = 0.0191).Ин натиљањо нишон медињанд, ки гиардини алфа-2 ва алфа-7,3 гиардин тавассути фаъол кардани inflammasome NLRP3 дар vivo сирояти G. duodenalisро кам мекунад.
Нақши pcDNA3.1(+)-giardins дар сирояти G. duodenalis.Мушҳо бо плазмидҳои рекомбинати эукариотикии экспрессияи pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine ё pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine эм карда шуданд (IM) ва сипас бо кистаҳои G. duodenalis (ig) мубориза бурданд.Гурӯҳи PBS ва pcDNA3.1 (+) + гурӯҳи табобати кистаи duodenal ҳамчун гурӯҳҳои назорати манфӣ истифода шуданд ва гурӯҳи табобати кистаи duodenal ҳамчун гурӯҳи назорати мусбӣ истифода шуданд.Гурӯҳи таҷрибавӣ ва режими табобат.b MT-и мушҳо дар ҳар як гурӯҳҳои гуногуни табобат барои 7 рӯз пас аз мушкилот назорат карда шуд.Ситорачаҳо фарқияти назаррасро байни гурӯҳҳо дар гурӯҳи G. duodenalis ва pcDNA3.1(+)-alpha-2 лямбдинӣ нишон медиҳанд, *P <0.05, **P <0.01 ва ***P <0.001;аломати доллар ($) фарқияти назаррасро байни ҳар як гурӯҳи G. duodenalis ва гурӯҳи pcDNA3.1 (+) -алфа-7.3 jardine, $$P<0.01 ва $$$P<0.001 нишон медиҳад.в Сарбории паразитӣ бо роҳи ҳисоб кардани шумораи трофозоитҳо дар 1 мл шустани рӯдаи дувоздаҳангушта (дарозии 3 см) муайян карда шуда, бо миқдори паразитҳо дар як см рӯдаи дувоздаҳангушта ифода карда мешавад.Тафовут байни гурӯҳи сирояти G. duodenalis, гурӯҳи лямбдини pcDNA3.1(+)-алфа-2 ва гурӯҳи лямбдини pcDNA3.1(+)-альфа-7.3 тавассути яктарафа ANOVA бо истифода аз версияи нармафзори SPSS 22.0 таҳлил карда шуданд.Ситорачаҳо фарқиятҳои назаррасро дар **P<0.01 ва ***P<0.001 нишон медиҳанд.г Тағйироти гистопатологӣ дар рӯдаи duodenum.Тирҳои сурх нишон медиҳанд, ки зарар ба villi, тирҳои сабз нишон медиҳанд, ки зарари криптҳо.Сатри миқёс: 100 мкм.e, f Таҳлили омории баландии виллуси рӯдаи duodenal муш (д) ва баландии крипт (f).Тафовут байни гурӯҳҳо дар расми 1d тавассути ANOVA яктарафа бо истифода аз версияи нармафзори SPSS 22.0 таҳлил карда шуд.Ситорачаҳо фарқиятҳои назаррасро дар *P<0.05 ва **P<0.01 нишон медиҳанд.Натичахои хафт тачрибаи мустакили биологи.ns, муҳим нест (P > 0,05)
Giardia duodenum як паразити маъруфи рӯдаи одамон ва дигар ҳайвоноти ширхӯр аст, ки боиси лямблиоз мегардад.Дар соли 2004, он ба Ташаббуси ТУТ дар бораи бемориҳои беэътиношуда дохил карда шуд, зеро паҳншавии он дар тӯли 6 сол, бахусус дар ҷомеаҳои пасти иҷтимоӣ-иқтисодӣ [32].Системаи иммунии модарзод дар аксуламали иммунӣ ба сирояти G. duodenalis нақши муҳим мебозад.Гузориш шудааст, ки макрофагҳои муш G. duodenalis-ро бо роҳи баровардани домҳои берун аз ҳуҷайра фурӯ мебаранд ва мекушанд [33].Тадқиқотҳои қаблии мо нишон доданд, ки G. duodenalis, паразити ғайриҳуҷайравӣ, p38 MAPK, ERK, NF-κB p65 ва NLRP3 роҳҳои сигнализатсияи илтиҳобиро дар макрофагҳои муш барои танзими аксуламалҳои илтиҳобии мизбон фаъол мекунад ва GEV-и озодшуда метавонад ин равандро афзоиш диҳад.13], 24].Бо вуҷуди ин, PAMP-ҳои дақиқе, ки дар илтиҳоби аз ҷониби NLRP3 танзимшавандаи илтиҳобӣ дар GEV иштирок мекунанд ва нақши илтиҳоби NLRP3 дар лямблиаз то ҳол равшан карда мешаванд.Барои равшан кардани ин ду савол мо ин тадқиқотро анҷом додем.
Илтиҳоби NLRP3 дар ситоплазмаи ҳуҷайраҳои иммунӣ ҷойгир аст ва метавонад аз ҷониби зарраҳои гуногун ба монанди кристаллҳои кислотаи пешоб, токсинҳо, бактерияҳо, вирусҳо ва паразитҳо фаъол карда шавад.Дар таҳқиқоти бактериявӣ, токсинҳо ҳамчун PAMP-ҳои калидӣ муайян карда шудаанд, ки сенсорҳои илтиҳобиро фаъол мекунанд, ки боиси илтиҳоб ва марги ҳуҷайра мешаванд [34].Баъзе токсинҳои сохтории гуногун, ба монанди гемолизин аз Staphylococcus aureus [35] ва Escherichia coli [36], гемолизин BL (HBL) аз энтеротоксин (NHE) [37], ба фаъолшавии илтиҳоби NLRP3 мусоидат мекунанд.Тадқиқотҳои вирусӣ нишон доданд, ки сафедаҳои вирулентӣ ба монанди сафедаи лифофаи SARS-COV-2 (E) [38] ва протеини вируси Zika NS5 [39] PAMP-ҳои муҳими аз ҷониби ретсептори NLRP3 эътирофшуда мебошанд.Дар таҳқиқоти паразитҳо гузориш дода шудааст, ки бисёре аз паразитҳо бо фаъолсозии илтиҳоби мизбон алоқаманданд, ба монанди Toxoplasma gondii, Trichomonas vaginalis [40], Trypanosoma cruzi [41] ва лейшмания [42].Протеинҳои зиччи гранулаҳои GRA35, GRA42 ва GRA43, ки бо вирусентии Toxoplasma gondii алоқаманданд, барои индуксияи пироптоз дар макрофагҳои каламушҳои Люис заруранд [43].Илова бар ин, баъзе таҳқиқоти лейшмания ба молекулаҳои инфиродӣ, ки дар илтиҳоби NLRP3 иштирок мекунанд, ба монанди липофосфогликани мембранаи паразитӣ [44] ё металлопротеазаи руҳ [45] тамаркуз кардаанд.Дар байни оилаи генҳои алфа-гиардини ба анексин монанд, алфа-1 гиардин номзади эҳтимолии ваксина мебошад, ки дар модели муш аз G. duodenalis муҳофизат мекунад [18].Дар таҳқиқоти худ мо омилҳои вирусии G. duodenalis алфа-2 ва алфа-7,3 лямблияро интихоб кардем, ки ба лямблия хосанд, вале нисбатан камтар гузориш дода шудаанд.Ин ду гени мақсаднок ба вектори системаи экспрессияи эукариотии pcDNA3.1(+) барои таҳлили фаъолшавии илтиҳоб клон карда шуданд.
Дар модели муши мо, порчаҳои каспази ҷудошуда ҳамчун аломатҳои фаъолсозии илтиҳоб хизмат мекунанд.Ҳангоми ҳавасмандкунӣ, NLRP3 бо ASC ҳамкорӣ мекунад, прокаспазҳоро ҷалб мекунад ва каспазҳои фаъолро тавлид мекунад, ки про-IL-1β ва pro-IL-18-ро мутаносибан ба IL-1β ва IL-18-и баркамол ҷудо мекунанд.Каспазҳои илтиҳобӣ (каспазҳо-1, -4, -5 ва -11) як оилаи ҳифзшудаи протеазҳои систеин мебошанд, ки барои муҳофизати модарзод муҳиманд ва дар илтиҳоб ва марги барномавии ҳуҷайраҳо иштирок мекунанд [46].Каспаза-1 тавассути илтиҳоби каноникӣ фаъол мешавад [47], дар ҳоле ки каспазҳо-4, -5 ва -11 ҳангоми ташаккули илтиҳоби атипикӣ ҷудо мешаванд [48].Дар ин таҳқиқот, мо макрофагҳои перитонеалии мушро ҳамчун модел истифода бурдем ва p20 каспаза-1-ро, ки каспази 1-ро ҷудо кард, ҳамчун нишонаи фаъолсозии илтиҳоби NLRP3 дар таҳқиқоти сирояти G. duodenalis таҳқиқ кардем.Натиҷаҳо нишон доданд, ки бисёре аз алфа-гиардинҳо барои фаъолсозии маъмулии илтиҳоб масъуланд, ки бо кашфи молекулаҳои асосии вирулентӣ дар бактерияҳо ва вирусҳо мувофиқат мекунанд.Аммо, таҳқиқоти мо танҳо як экрани пешакӣ аст ва молекулаҳои дигаре ҳастанд, ки метавонанд илтиҳоби ғайриклассикиро фаъол кунанд, зеро таҳқиқоти қаблии мо ҳам илтиҳоби классикӣ ва ҳам ғайриклассикиро дар сирояти G. duodenalis пайдо кард [13].Барои муайян кардани минбаъдаи он, ки р20 каспаза-1-и тавлидшуда бо илтиҳоби NLRP3 алоқаманд аст, мо алфа-2 ва алфа-7.3 гиардинҳоро ба макрофагҳои перитонеалии муш интиқол додем, то сатҳҳои ифодаи сафедаи молекулаҳои калидӣ ва сатҳҳои олигомеризатсияи ASC-ро муайян кунанд, ки ҳарду α-гиардинҳоро фаъол мекунанд. илтиҳоби NLRP3.Натиҷаҳои мо аз натиҷаҳои Манко-Прихода ва дигарон каме фарқ мекунанд, ки гузориш доданд, ки ҳавасмандкунии ҳуҷайраҳои Caco-2 бо штаммҳои G. muris ё E. coli EPEC танҳо метавонад шиддатнокии флуорессенсияи NLRP3, ASC ва каспаза-1, гарчанде ки ба таври назаррас нест, дар ҳоле ки чӣ тавр costimulation G. muris ва E. coli сатҳи се сафеда зиёд [49].Ин тафовут метавонад аз сабаби фарқият дар интихоби намудҳои Giardia, хатҳои ҳуҷайра ва ҳуҷайраҳои ибтидоӣ бошад.Мо инчунин бо истифода аз MCC950 дар мушҳои зани 5-ҳафтаинаи WT C57BL/6, ки ба G. duodenalis бештар ҳассосанд, таҳлилҳоро дар vivo анҷом додем.MCC950 як ингибитори хурди тавоно ва интихобкунандаи молекулаи NLRP3 мебошад, ки фаъолсозии каноникӣ ва ғайриканоникии NLRP3-ро дар консентратсияи наномолярӣ блок мекунад.MCC950 фаъолсозии NLRP3-ро бозмедорад, аммо ба фаъолсозии роҳҳои илтиҳобии AIM2, NLRC4 ва NLRP1 ё роҳҳои сигнализатсияи TLR таъсир намерасонад [27].MCC950 фаъолсозии NLRP3-ро блок мекунад, аммо оғози NLRP3, ҷараёни K+, вуруди Ca2+ ё таъсири мутақобилаи NLRP3 ва ASC-ро бозмедорад;ба ҷои он, он фаъолсозии NLRP3-ро бо роҳи бастани олигомеризатсияи ASC бозмедорад [27].Аз ин рӯ, мо MCC950-ро дар як таҳқиқоти in vivo барои муайян кардани нақши илтиҳоби NLRP3 пас аз тазриқи гиардин истифода кардем.Каспаза-1 p10 фаъолшуда ситокинҳои зидди илтиҳобии pro-IL-1β ва pro-IL-18-ро ба IL-1β ва IL-18-и баркамол ҷудо мекунад [50].Дар ин таҳқиқот, сатҳҳои хунобаи IL-1β дар мушҳои бо гиардин муолиҷашуда бо MCC950 ё бидуни он ҳамчун нишондиҳандаи фаъол шудани илтиҳоби NLRP3 истифода шуданд.Тавре ки интизор мерафт, табобати MCC950 сатҳи хунобаи IL-1β-ро ба таври назаррас коҳиш дод.Ин маълумотҳо равшан нишон медиҳанд, ки G. duodenalis giardin alfa-2 ва giardin alfa-7.3 қодиранд, ки илтиҳоби муши NLRP3-ро фаъол созанд.
Маълумоти муҳиме, ки дар даҳсолаи охир ҷамъ оварда шудаанд, нишон доданд, ки IL-17A танзимгари асосии масуният бар зидди G. muris мебошад, сигнализатсияи IL-17RA, истеҳсоли пептидҳои зиддимикробӣ ва танзими фаъолсозии комплемент мебошад [51].Бо вуҷуди ин, сирояти Giardia дар калонсолон бештар рух медиҳад ва гузориш дода шудааст, ки сирояти Giardia дар мушҳои ҷавон вокуниши IL-17A-ро фаъол намекунад, то таъсири муҳофизатии худро нишон диҳад [52], ки муҳаққиқонро водор мекунад, ки дигар гиардияҳои иммуномодуляториро ҷустуҷӯ кунанд.механизмҳои сирояти гельминтҳо.Муаллифони як таҳқиқоти ахир гузориш доданд, ки G. muris метавонад илтиҳоби NLRP3-ро аз ҷониби E. coli EPEC фаъол созад, ки ба истеҳсоли пептидҳои зиддимикробӣ мусоидат мекунад ва қобилияти пайвастшавии он ва шумораи трофозоитҳоро дар рӯда коҳиш медиҳад ва ба ин васила шиддати ғафсии рӯдаро коҳиш медиҳад. бемориҳое, ки аз бактерияҳо ба вуҷуд меоянд [49].Илтиҳоби NLRP3 дар рушди бемориҳои гуногун иштирок мекунад.Таҳқиқот нишон доданд, ки Pseudomonas aeruginosa аутофагияро дар макрофагҳо ба вуҷуд меорад, то марги ҳуҷайраҳоро пешгирӣ кунад ва ин раванд аз фаъолшавии илтиҳоби NLRP3 вобаста аст [53].Барои N. caninum, фаъолсозии навъҳои оксигени реактивии илтиҳобии NLRP3 такрори онро дар мизбон маҳдуд мекунад ва онро ҳадафи эҳтимолии терапевтӣ месозад [9].Муайян шудааст, ки Paracoccidioides brasiliensis фаъолсозии илтиҳоби NLRP3-ро дар ҳуҷайраҳои дендритикии мағзи устухони муш ба вуҷуд меорад, ки дар натиҷа ситокини илтиҳобии IL-1β, ки дар муҳофизати мизбон нақши муҳим мебозад [10].Якчанд намудҳои лейшмания, аз ҷумла L. amazonensis, L. major, L. braziliensis ва L. infantum chagasi, NLRP3 ва каспази аз ASC вобаста-1-ро дар макрофагҳо фаъол мекунанд, инчунин сирояти лейшмания.Репликатсияи паразитҳо дар мушҳо, ки дар гени NLRP3/ASC/caspase-1 камбудӣ доранд [11].Замбони ва дигарон.Гузориш шудааст, ки сирояти лейшмания ба фаъолсозии илтиҳоби NLRP3 дар макрофагҳо оварда мерасонад, ки такрори паразитҳои дохили ҳуҷайраро маҳдуд мекунад.Ҳамин тариқ, Leishmania метавонад фаъолсозии NLRP3-ро ҳамчун стратегияи пешгирӣ боздорад.Дар таҳқиқоти in vivo, илтиҳоби NLRP3 ба рафъи лейшмания саҳм гузоштааст, аммо ба бофтаҳо таъсир намерасонд [54].Баръакс, дар омӯзиши гельминтозҳо, фаъолсозии илтиҳоби NLRP3 иммунитети муҳофизатии мизбонро бар зидди гелминтозҳои меъдаю рӯда пахш кард [12].Шигелла яке аз бактерияҳои асосии боиси дарунравӣ дар саросари ҷаҳон мебошад.Ин бактерияҳо метавонанд истеҳсоли IL-1β-ро тавассути ресепторҳои P2X7 тавассути Efflux K+, намудҳои реактивии оксиген, кислотаи лизосомалӣ ва осеби митохондриалӣ ба вуҷуд оранд.Илтиҳоби NLRP3 фагоцитоз ва фаъолияти бактерицидии макрофагҳоро бар зидди шигелла ба таври манфӣ танзим мекунад [55].Тадқиқотҳои плазмодиум нишон доданд, ки мушҳои норасоии AIM2, NLRP3 ё каспаза-1, ки бо Plasmodium сироят шудаанд, сатҳи баланди интерферони навъи 1 истеҳсол мекунанд ва ба сирояти Plasmodium тобовартар мебошанд [56].Бо вуҷуди ин, нақши гиардини алфа-2 ва алфа-7.3 дар таҳрик додани фаъолсозии патогении илтиҳоби NLRP3 дар мушҳо норавшан аст.
Дар ин тадқиқот, ҷилавгирӣ аз илтиҳоби NLRP3 аз ҷониби MCC950 BW-ро коҳиш дод ва шумораи трофозоитҳоро дар моеъи шустани рӯда дар мушҳо зиёд кард, ки дар натиҷа тағйироти шадиди патологӣ дар бофтаи duodenal рӯй медиҳад.Гиардини альфа-2 ва алфа-7,3 лямбосими муши NLRP3-ро фаъол мекунанд, вазни бадани мушро зиёд мекунанд, шумораи трофозоитҳоро дар моеъи шустани рӯда кам мекунанд ва осеби патологии рӯдаи duodenal-ро сабук мекунанд.Ин натиҷаҳо нишон медиҳанд, ки G. duodenalis метавонад илтиҳоби мизбони NLRP3-ро тавассути алфа-2 гиардин ва алфа-7,3 гиардин фаъол карда, патогении G. duodenalis дар мушҳоро коҳиш диҳад.
Дар маҷмӯъ, натиҷаҳои мо нишон медиҳанд, ки лямбдинҳои алфа-2 ва алфа-7,3 боиси фаъолшавии илтиҳоби мизбони NLRP3 ва коҳиш додани сирояти G. duodenalis дар мушҳо мешаванд.Аз ин рӯ, ин молекулаҳо ҳадафҳои умедбахш барои пешгирии лямблиоз мебошанд.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
Liang AKS, Liang AAM, Huang AHC, Sergi KM, Kam JKM.Giardiasis: шарҳи умумӣ.Ба наздикӣ маълум шуд, ки Пэт Инфламм ба маводи мухаддир аллергия дорад.2019;13:134–43.
Escobedo AA, Tsimerman S. Giardiasis: баррасии фармакотерапия.Андешаи коршиноси фармацевт.2007;8: 1885–902.
Тян Хуафэн, Чен Бин, Вен Цзянфенг.Giardiasis, муқовимат ба маводи мухаддир ва кашфи ҳадафҳои нав.Ҳадафҳои маводи мухаддирро сироят мекунад.2010;10:295–302.
Wang Z, Zhang X, Xiao Yi, Zhang W, Wu X, Qin T, ва ғайра NLRP3 inflammasome ва бемориҳои илтиҳобӣ.Oxide Med Cell Longev.2020; 2020: 4063562.
Chen GY, Núñez G. Нақши inflammasome дар илтиҳоби меъда ва саратон.Гастроэнтерология.2011;141:1986–99.
Пеллегрини С, Антониоли Л, Лопес-Кастеҷон Г, Бландиззи С, Форнай М. Фаъолсозии каноникӣ ва атипии NLRP3 илтиҳобӣ дар чорроҳаи таҳаммулпазирии иммунӣ ва илтиҳоби рӯда.пеш аз иммунӣ.2017;8:36.
Li L, Wang XC, Gong PT, Zhang N, Zhang X, Li S, et al.Фаъолсозии илтиҳобии NLRP3 тавассути ROS миёнаравӣ дар посух ба сирояти N. caninum иштирок мекунад.Вектори паразитӣ.2020;13:449.